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标题:【求助】电泳条带为何不清晰

idea2011[使用道具]
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发表于 2014-6-14 17:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】电泳条带为何不清晰


最近做SDS-PAGE，电泳条带不清楚，大家知道是什么原因吗？如图。胶浓度为10%。


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2014-6-14 17:45
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ladyhuahua[使用道具]
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发表于 2014-6-14 17:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

样品处理是不是有问题？缓冲液的纯度，最好是新鲜配制的，PH值也要注意，防止有蛋白不溶解。还有凝胶缓冲液和电泳缓冲液是不是有问题？
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831226[使用道具]
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发表于 2014-6-14 17:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

哦,我的也不是很清楚,今天跑出来的带还是弯的,是电泳电压的问题吗?还是胶的问题?我怀疑是不是电压有问题,我的电泳仪电压定的不稳,开始是100V,到电泳结束就只到60V了,电流150A,请问怎么定压呀?
我的是六一的DYY-2C电泳仪,我是这样调定压的:先预设U=0,I最大,P最大,再工作调到所要电压,可每次调到超过50V,电泳就自动转为稳流了???
这是怎么会事?是电泳液的问题吗?
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发表于 2014-6-14 17:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

看了大家的回复，在我的操作中是不是有以下问题：
1.我加了β-巯基乙醇的5Χ上样buffer放在4度，煮样品时拿出来直接用，是不是SDS未完全溶解的影响，上样buffer每次用前要温育使SDS溶解吗？
2.上样前未离心，这样对电泳有什么影响吗？
3.我再检查胶缓冲液和电泳缓冲液的pH。
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发表于 2014-6-14 17:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也遇到了相似的情况，我用的是六一的DYY-７C电泳仪，是专门做转移电泳的，我用的是恒压，开始是基层６０伏，分离１００或８０伏，我把我的样品全换了一遍还是很模糊！上样前最好要离心　！！
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idea2011[使用道具]
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发表于 2014-6-14 17:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我今天又做了一次，只是重新配制了2×上样buffer，结果条带就很清晰，看来还是上样缓冲液的问题。
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remenb[使用道具]
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发表于 2014-6-14 17:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

有时候样品盐浓度过高电泳时会产生纵向的条带，会导致条带不清晰的!
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