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标题:【求助】P21老是做不出条带

lagua123[使用道具]
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发表于 2014-6-14 18:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】P21老是做不出条带

我用WB的方法做了一个月的P21,始终没有结果,有谁能帮帮我,太无助了,时间又很紧,觉得好紧张.请战友们赐教,谢谢!不胜感激!
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婴儿脸[使用道具]
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发表于 2014-6-14 18:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

天，我正准备做呢，不知道你用的是哪里的抗体阿？？
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lagua123[使用道具]
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发表于 2014-6-14 18:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #2 婴儿脸 的帖子

我是用Santa的抗体,你呢,抗体买了没?哪家公司的?
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yychen[使用道具]
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发表于 2014-6-14 18:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我用过的好像是 cell signalling 的。你能描述详细点儿，要不没办法知道哪块儿可能有问题。
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lagua123[使用道具]
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发表于 2014-6-14 18:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

相关疾病：
浆细胞白血病
我上样量用到了40ug,转膜后用丽春红染过小分子量还是清楚的，就是没有任何的条带出来。用的标本有HL-60细胞受到药物干预后的细胞还有正常的人的细胞和白血病的细胞，没有一个有条带出来。仁兄一定是有做出来吧，你是什么标本呢，非常希望得出您的帮助！
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gogo[使用道具]
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发表于 2014-6-14 18:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也做过P21的WB,药物处理的HL60细胞.我觉得还是比较好做的，我用的CST抗体,我感觉P21在HL60中表达比较低,建议你用较好ECL 发光液.因为以前我用santa cruz 的没有暴出来,换了发光液就好了
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xueyouzhang[使用道具]
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发表于 2014-6-14 18:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也是用细胞系加药处理，用的是 Cell Signaling Technology 的抗体，然后用的是 Santa Cruz 的 Luminol Reagent。可能 HL60 p21表达的确低（我没做过），换个发光液也许能好一些。
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lagua123[使用道具]
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发表于 2014-6-14 18:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢两位老师的指点，想请问一下哪种细胞株可以用来作阳性对照，也就是表达比较强的，我想是不是我的一抗不行，还有ECL发光液贵不？我的经费也不多。
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nut6694[使用道具]
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发表于 2014-6-14 18:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你用的 HL 60 细胞是不是 p53 knock-out 的？ 我检索了一下，有很多文章用的是 p53 缺失的 HL 60。如果p53 缺失，p21 可能不太容易被诱导表达。
你可以找个含野生型 p53 的细胞系，用DNA 损伤药诱导，p53 和p21 都应该被诱导而表达。
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lagua123[使用道具]
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发表于 2014-6-14 18:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #9 nut6694 的帖子

谢谢你，没错，我换个细胞株做做看，看能不能出来！
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