蛋白质与蛋白组学 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】蛋白质提取疑惑

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 11  1/2 12››
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】蛋白质提取疑惑

prettygirl@[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 107994
精华 0
积分 262
帖子 244
信誉分 100
可用分 1996
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-4-27
状态 离线
1

发表于 2014-6-14 18:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】蛋白质提取疑惑


我提取了大鼠海马的蛋白质，跑胶和转膜分别用丽春红和考马斯亮蓝染色，发现大于85KD的蛋白条带基本没有，请问是什么原因？
顶部
prettygirl@[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 107994
精华 0
积分 262
帖子 244
信誉分 100
可用分 1996
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-4-27
状态 离线
2

发表于 2014-6-14 18:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

是不是海马组织大分子量蛋白含量比较少的原因，请大家帮忙，很着急。谢谢
顶部
prettygirl@[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 107994
精华 0
积分 262
帖子 244
信誉分 100
可用分 1996
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-4-27
状态 离线
3

发表于 2014-6-14 18:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请 问大家蛋白质 提取后的浓度多高比较好，我提的蛋白质浓度2－3毫克/毫升，有人说浓度太低了，但是也有人说还可以，到底多高比较好。如果浓度低的话，怎么办？？？？
顶部
ha111[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 72969
精华 0
积分 821
帖子 1239
信誉分 101
可用分 7048
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-16
状态 离线
4

发表于 2014-6-14 18:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
海马组织不是很清楚
至于浓度,我认为还可以,但是得看你目的蛋白的表达量啊
如果需要纯化的话,tca 丙酮法就可以了,找一篇经典文章看一下就可以了
good luck!!!!
顶部
ending[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76092
精华 0
积分 771
帖子 1242
信誉分 100
可用分 6981
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-1
状态 离线
5

发表于 2014-6-14 18:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

基本上蛋白质浓度应该够了，会不会是转膜时出问题？你可以是一下将膜及转过膜的胶一起染色，看看是不是转膜的问题。两个一起用马斯亮蓝染色应该就可以。
顶部
eric930[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79368
精华 0
积分 722
帖子 1061
信誉分 101
可用分 6148
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-12-10
状态 离线
6

发表于 2014-6-14 18:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我觉得你提取的蛋白浓度已经很浓了，你可以先将蛋白电泳，然后银染，观察是否有大分子蛋白，如果有的话，在提高上样量来做WB.
顶部
prettygirl@[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 107994
精华 0
积分 262
帖子 244
信誉分 100
可用分 1996
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-4-27
状态 离线
7

发表于 2014-6-14 18:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢！但是我发现染色总是条带很淡，不敢往下做。
顶部
eric930[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79368
精华 0
积分 722
帖子 1061
信誉分 101
可用分 6148
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-12-10
状态 离线
8

发表于 2014-6-14 18:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

有可能是海马组织蛋白含量较少的原因,
可以尝试检测一下管家基因的的水平,如果水平还可以的话,那就有可能是你的目的基因的丰度比较低, 可以增加上样量看看.
顶部
prettygirl@[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 107994
精华 0
积分 262
帖子 244
信誉分 100
可用分 1996
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-4-27
状态 离线
9

发表于 2014-6-14 18:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我曾经做过管家基因蛋白，条带很浓，但是大分子蛋白条带很淡。
顶部
jkobn[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 75366
精华 0
积分 468
帖子 574
信誉分 101
可用分 3711
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-10-22
状态 离线
10

发表于 2014-6-14 18:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你用的多大浓度的胶啊
试一试低浓度的分离胶
顶部
 11  1/2 12››