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标题:【求助】SDS-PAGE胶的凝固问题?

阿凡提[使用道具]
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发表于 2014-6-14 21:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】SDS-PAGE胶的凝固问题?


我前天做了一次胶,用的丙稀酰铵－甲叉双丙稀酰铵贮存液是用的6个月以前别人配好的,其他的倒是新的,但配好的胶倒到槽子里的凝的蛮好的,可以跑PAGE.胶还蛮好的.可是剩余的胶放了一天却就是不凝固状态.搞不懂?
有人能解释一下吗?
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dmg[使用道具]
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发表于 2014-6-14 21:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

丙烯酰胺与双丙烯酰胺聚合过程由TEMED和过硫酸铵激发，过硫酸铵在水溶液中形成过硫酸自由基，自由基再激活TEMED，TEMED作为载体提供一个未配对电子将丙烯酰铵单体转化成自由基激活后者。激活和未激活的丙稀酰胺单体开始多聚链延伸，同时与bis交联成网状结构。空气中的氧气会干扰聚合反应，因此尽量减少与空气接触时间。灌胶时与氧气接触时间短，剩余胶暴露在氧气中，因此不会凝
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eric930[使用道具]
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发表于 2014-6-14 21:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
为什么我的胶就是不凝呢？丙稀酰铵－甲叉双丙稀酰铵贮存液是买的水剂，其他的都是自己新配的，ＡＰ浓度分别为总量的１倍，２倍，６倍，８倍，１０倍，１２倍，结果还是都不凝．我是先用ＥＰ管少量配制的，想试一下看哪个浓度的效果较好．
哪位能帮我分析一下是什么原因吗？
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pencil菲[使用道具]
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发表于 2014-6-14 21:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

判断AP是否失效的简单方法就是：听听它溶解的时候是否有啼啼嗒嗒的声音，有，OK ；没有，过期了。另外，结块也是判断过期的标准。
不凝固，一般主要就是AP和TEMED引起的，其他，如丙烯酰胺与双丙烯酰胺的问题我们也遇到过，但不会是完全不凝，只是会凝得不好而已，为这事我们还退过几次货。
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gogo[使用道具]
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发表于 2014-6-14 21:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

建议按“分子克隆”的配方，我比较过，还是这个好。
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leifengta[使用道具]
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发表于 2014-6-14 21:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

丙稀酰铵－甲叉双丙稀酰铵贮存液，在自然光、v射线和超声波的引发下容易聚合，所以应该在棕色瓶中避光保存，虽然这两种单体在固体状态时相对比较稳定，他们可在室温下保存一年，但在溶液状态时是不稳定的，30%的丙烯酰胺只能在4度下，保存一个月左右。丙烯酰胺在储存期间（在酸碱条件下）会水解成丙烯酸，而增加电泳时的电内渗现象和减慢电泳迁移率。
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阿凡提[使用道具]
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发表于 2014-6-14 21:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢大家的帮忙，我重新换了新的APS，问题解决了。
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tianmei001[使用道具]
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发表于 2014-6-14 21:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
这种情况我见多了.很有可能是Tris.cl的pH值不对,用pH计测一下先,要精确.
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gogo[使用道具]
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发表于 2014-6-14 21:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

凝胶储液不能放置超过一个月，否则丙稀酰铵会转变成丙稀酰酸，导致凝胶电泳时电渗现象比较严重，影响电泳效果。
楼主的问题是因为剩余的胶与空气接触导致氧自由基失效，而灌胶的由于与空气接触较少，所以在自由基的作用下可以凝固
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