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标题:【求助】有谁碰到过丙酮沉淀使蛋白样品盐浓度增加的?

bananapeople[使用道具]
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【求助】有谁碰到过丙酮沉淀使蛋白样品盐浓度增加的?


我的样品 浓度较低,所以浓缩了一下,用来做IEF,结果这次聚焦电流很大,对比上次的样品,提取方法和缓冲液都一样,就多了个浓缩步骤,所以怀疑是将盐离子也浓缩了。
各位有没有碰到这种情况,如何解决?
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greenbee[使用道具]
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个人意见:
1.如果样品 浓度较低,在处理样品时就应该考虑加入裂解液量的问题,试想:如果样品在裂解液中的溶解度已经达到最大,那浓缩的意义又是什么呢?加入适量的裂解液,保证样品在其中有最大的溶解就是目的。
2.就沉淀这种方法来说,由于引入盐较多,如您所说,浓缩使盐浓度进一步增大,本来刚刚好的,浓缩之后就过了。
3.建议采用一种引入盐较少而又处理步骤较少的方法(现在这种方法还是有一些的,可以试试看嘛),因为沉淀方法会使蛋白被强行分割成为两个部分,而对这两个"不同"的部分的处理方法又不尽相同,那又怎么保证重复性和完整性呢?
4.不知道您是如何解决这些问题的,如果有说得不当的地方请批评指正
祝实验顺利!
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xevin[使用道具]
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3
 

给你推荐一个蛋白沉淀的方法:
Anal.Biochem.138,141-143,1983
应该能够解决你的问题
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finger[使用道具]
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A rapid method based on a defined methanol-chloroform-water mixture for the quantitative precipitation of soluble as well as hydrophobic proteins from dilute solutions (e.g., column chromatography effluents) has been developed. The effectiveness of this method is not affected by the presence of detergents, lipids, salt, buffers, and beta-mercaptoethanol.
cuturl('http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?cmd=retrieve&db=pubmed&list_uids=6731838&dopt=Abstract')
楼上提供的文献有点错误,1984~
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bananapeople[使用道具]
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5
 

原理是氯仿/甲醇法。
我曾经比较过这些方法。该方法的确在除盐和酚类物质方面有独到之处,而且我还改进了一下。但在回收率方面不如丙酮沉淀。该方法回收率一般只在30%左右,而在我的实验室中,丙酮沉淀法回收率在80%以上。
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wanglaoshi[使用道具]
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可以问一下你的丙酮方法具体步骤?
TCA/丙酮, 和 丙酮,效果上有区别吗
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wanglaoshi[使用道具]
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7
 

请问一下 丙酮沉淀法提取的蛋白可以用来做elisa吗?
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