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标题:【求助】封闭液的问题

ffooll[使用道具]
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发表于 2014-6-14 21:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】封闭液的问题

大家好,最近几次做western封闭或一抗过夜时,总是出现奶粉成碎块状析出的现象,不知什么原因.我的封闭液是TBST+5%脱脂奶粉,tween-20浓度为0.1%,而且我的封闭液配的时候奶粉肯定是全溶的,没有问题.请帮忙解答一下.谢谢!
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ffooll[使用道具]
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发表于 2014-6-14 21:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

再补充一下:原来以为是奶粉时间长了,就新买了的奶粉,结果还是析出,后来以为是TBST的问题,我又重配的TBST,还是析出.再后来以为是PH值有变化,奶粉才析出,我又测了PH值,7.5,没有问题,现在实在想不出是什么原因了
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ROSE李[使用道具]
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发表于 2014-6-14 21:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你封闭时加了多少的封闭液啊
封闭过夜时的温度大约是多少
建议:封闭过夜时加大封闭液的量,也浪费不了多少
再温度高的时候,把你的容器的口封上
防止因为水分的蒸发导致奶粉的析出!!!!!!
good luck!!!
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ffooll[使用道具]
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发表于 2014-6-14 21:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢回复.加了4ml的封闭液,温度是23-24度,因为开着空调,室温.我是在加一抗的时候和封闭时候都有析出,封闭4-5小时,时间短,未见析出,只是一抗过夜时间长就析出.实在不知道为啥啊
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jingling845[使用道具]
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发表于 2014-6-14 21:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

不是很明白你的操作
(我是在加一抗的时候和封闭时候都有析出,封闭4-5小时,时间短,未见析出,只是一抗过夜时间长就析出.)
是什么时间析出啊?你一抗过夜时怎么会有奶粉的析出?你是把一抗加到封闭液里了吗?还是封闭完没洗就一抗杂交啊 ?
我们的操作是:
封闭:室温2小时,10ml左右的封闭液
tbst洗3遍,每次5分钟
一抗杂交过夜
效果一直不错
你根据你的情况试一试吧
good luck !
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ffooll[使用道具]
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发表于 2014-6-14 21:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我是用封闭液稀释的一抗啊,先封闭4-5小时,再加用封闭液稀释后的一抗过夜.第2天早上来奶粉就析出了,就是这么回事.
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发表于 2014-6-14 21:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我是用封闭液稀释的一抗啊,先封闭4-5小时,再加用封闭液稀释后的一抗过夜.第2天早上来奶粉就析出了,就是这么回事.你说的水分蒸发是不可能的啊,杂交袋封的好好的,怎么会水分蒸发啊
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发表于 2014-6-14 21:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

4度过夜吗?
如果不是,建议一试,我们长期这样用,效果不错
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jingling845[使用道具]
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发表于 2014-6-14 21:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

哦
是这样啊
我们做时,一般不用封闭液稀释一抗,用的是tbst,里面有tween20,同样能达到增强特异性的目的.
我们用杂交袋时,一般只加1毫升的稀释后的一抗,不知道你们加多少?
至于析出的问题,你可以作个对比实验,在杂交袋里只加上你的封闭液,然后4度过夜,第2天看看杂交袋上是否有奶粉析出,不就清楚了!!
祝好运!!!!!!!
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youreyes[使用道具]
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发表于 2014-6-14 21:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可能是水分蒸发了吧,还有奶粉配的本来就是乳浊液,久了不动有析出不奇怪啊.你过夜最好放到摇床.我是用TBS稀释一抗,好象也还行,加那么少的一抗好象不行吧?
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