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标题:【求助】求助Tricine-sds-page

okhaha[使用道具]
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【求助】求助Tricine-sds-page

才学做Tricine-sds-page,有几个问题请教:
1。 跑电泳时的电压(电流)是多大,是不是要根据胶的长和宽来计算?按V/cm或mA/cm计算?电压与胶的厚度有关吗?
我用的是六一厂的槽子,胶宽9cm,高7cm(不含梳齿)厚1.5mm。
2。电泳刚开始时跑得还好,示踪迹压成一条线,跑到分离胶的1/3时 开始弥散,并且跑得极其之慢,蛋白质也只跑到一半。
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ladyhuahua[使用道具]
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建议你看看cuturl('http://www.nature.com/nprot/prelaunch/pdf/nprot.2006.4.pdf')
这个文章对小分子量蛋白的tricine-sds-page电泳有很详细的阐述。
不过根据我们的经验,电泳时在集层胶60v足够,分离胶中可以加到120v。你的胶比较厚,估计电压会更高。
到了分离胶有点弥散正常的,速度慢电压加大就是。
蛋白质只跑到了一半什么意思呢?考染看到的?
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831226[使用道具]
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3
 

1.分离胶浓度是多大?适当降低浓度试一下。
2.电极缓冲液PH是否准确?
3.电泳应在4℃环境进行。
4.你的胶厚度是1.5mm,我们一般用1mm或0.75mm,你的目的蛋白分子量多大?
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okhaha[使用道具]
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建议你看看 cuturl('http://www.nature.com/nprot/prelaunch/pdf/nprot.2006.4.pdf')
这个文章对小分子量蛋白的tricine-sds-page电泳有很详细的阐述。
不过根据我们的经验,电泳时在集层胶60v足够,分离胶中可以加到120v。你的胶比较厚,估计电压会更高。
到了分离胶有点弥散正常的,速度慢电压加大就是。
蛋白质只跑到了一半什么意思呢?考染看到的?
......

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积层胶恒压30v,跑大约50-60分钟,分离胶恒流30mA,跑4h的时候溴芬兰跑了分离胶的三分之二,就跑的很慢很慢了。烤染后蛋白才跑到胶的三分之一。不过条带尚清晰。
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831226[使用道具]
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或许你的蛋白分子量偏大,跑到三分之一也是正常的
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okhaha[使用道具]
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QUOTE:
原帖由 831226 于 2014-6-17 15:05 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
或许你的蛋白分子量偏大,跑到三分之一也是正常的

问题是14。4kd的也只跑不动
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wood533[使用道具]
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你把跑出来的胶先染色看看蛋白到底跑到什么程度了。完全靠染料作蛋白电泳前沿判断是不行的,Tricine系统是会发生前沿指示染料弥散现象的,建议你多试几次,以确定对于你的蛋白所适合的电泳时间。祝你好运!
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831226[使用道具]
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14.4KDa 就是跑到一半的地方,胶的下半部分基本上是10KDa以下的
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