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标题:【求助】WB图片分析

flower@@[使用道具]
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发表于 2014-6-17 15:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】WB图片分析


各位战友，帮我分心一下我作的WB的图片。5％脱脂奶粉封闭2小时，一抗(santa cruz ;1:100)2 小时，二抗1：10000 90分钟后显影，发现每个涌道都显影，没有明显的特异条带的出现。请问涌道出现这种情况的显影是什么原因呢？上次用1：1000的二抗作发现膜上均匀弥漫荧光，这次降低2抗浓度弥漫荧光不见了却出现现在这种情况。请各位给指点指点，先谢谢了！


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2014-6-17 15:07
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发表于 2014-6-17 15:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

还有FILM上的黑点是什么东西呢
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发表于 2014-6-17 15:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

怀疑抗体有问题
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发表于 2014-6-17 15:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你说是一抗还是二抗呢？一抗我作免疫组化效果很好的，而且说明书上讲可以作WB的。
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fsdd817[使用道具]
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发表于 2014-6-17 15:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

不过, santa cruz 的抗体应该是不错的. 换一下抗体浓度试一试
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发表于 2014-6-17 15:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我没有碰倒过这种现象
感觉你的封闭时间有问题,建议增加封闭时间,4小时以上
还有你的蛋白是否有问题,建议你留一半胶染一下
个人意见,希望对你有帮助
good luck!!!!!
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发表于 2014-6-17 15:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

有人认为santa的抗体不稳定，没有办法，今天硬着头皮用博士德的试了一下，白版一张，啥也没有，郁闷。各位前辈请多多指点。
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发表于 2014-6-17 15:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
有没有可能是抗体失效了，或时间太长了。我以前遇到过，后来换了新的抗体就好了。
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flower@@[使用道具]
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 小中大

抗体是今年春节刚订回来的，作面议组画很好， 您认为还会是其他什么情况呢？我们实验室几个用一抗是羊抗的实验都不怎么好，您认为还会是什么原因呢？
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taoshengyijiu[使用道具]
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发表于 2014-6-17 15:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
建议延长封闭时间，洗膜时多用点TBST,也可以用BSA试试。
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