蛋白质与蛋白组学

1.可能是抗体的问题，结合的不好、
2.也可能是洗膜的次数太多了，我以前做过也有这种情况。

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1）既然LZ曾经做出过结果，那么就不是抗体的问题
2）洗膜还不至于将蛋白洗掉
另外，既然考染能看到蛋白，那么也排除电泳和抗原的问题，个人认为可能是转膜环节出现了问题，因而导致了实验的重复性不好没。
可能情况,你电极有没有搞错,你的胶和膜的顺序对吗，有没有短路？
建议你在转膜的时候加入预染蛋白Marker，推荐使用MBI的预染Marker，不贵才300多，0.5ml，足够做100次的。
另外，在常规转膜后，丽春红预染一下看看，如果没有蛋白的话，接下来的环节也可以免了

各位，大家好！最近做wb两次，一次结果是显色过浅（实验室另一位男同学不显色，但膜用考马氏亮兰显色后能看见泳道及目的蛋白的表达），请教过国外的教授，她考虑是显色剂相关问题，于是我们重配washing buffer及AP等试剂，结果这次是不显色，用考马氏亮兰显色后能看见若干条带，很不清楚，请问各位高手，问题到底在哪？实验室一大批人等着做wb呢。请各位帮忙分析一下吧。谢谢啦！

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请把你的流程贴出来吧，这样很难说的。考马斯一般不染瞙的，染料染过的瞙多少会影响抗体的结合。