【求助】酵母双杂交中这样的诱饵蛋白是不是自激活？ - 经验共享

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标题:【求助】酵母双杂交中这样的诱饵蛋白是不是自激活？

jkobn[使用道具]
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发表于 2014-6-17 16:18 资料个人空间短消息加为好友

小中大

说明书上写得可能很理想，我做过之后觉得上面说的那些只能做为参考，不能照着他的去做。
没有仔细看过所有的帖子，觉得你说的检测自激活有些不妥，应该是是BAIT与另一个载体共转，这样才能验证是否有自激活。
个人觉得X-beta-Gal去检测阳性很容易出现假阳性，X-alpha-Gal没有用过，查了一下觉得似乎更好用，不过太贵。
通过自己的实验，我觉得首先在QDO　PLATE上长，然后用3AT（20左右），这样得到的克隆就不会太多了。
很愿意与大家一起讨论Y2H。
今天中午的时候刚送了140个去生工测序，想起这两个月的时间真是辛苦。

laughing妹[使用道具]
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发表于 2014-6-17 16:19 资料个人空间短消息加为好友

小中大

觉得你说的检测自激活有些不妥，应该是是BAIT与另一个载体共转，这样才能验证是否有自激活
是这样的吗？我刚开始做，不是太懂，如果同时转bait和另一个载体，那么有一个载体是不是AD空载体呢？
不知“基因小子”您是做哪个方面的，可以向您请教一下吗

xiaohuili1323[使用道具]
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发表于 2015-5-14 14:03 资料个人空间短消息加为好友

小中大

回复 #11 jkobn 的帖子

您好，我刚刚开始做酵母双杂，遇到些问题想请教您。。我是用一个bait筛选一个Library，AH109和Y187mating之后涂板。。我本来打算先在二缺+底物筛，再到四缺+底物筛。但是现在涂了二缺的大板子，就很浓，背景一片灰，有的一片蓝，没法挑单克隆啊。。是这个筛选策略有问题还是涂得问题啊？要稀释多少倍涂吗？这可在呢么办啊？望能和您进一步交流，请您赐教。我的qq 799980896,谢谢！

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