【求助】SDS-PAGE的样品处理中,如果不加热,...

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标题:【求助】SDS-PAGE的样品处理中,如果不加热,...

zhy平平[使用道具]
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发表于 2014-6-17 16:54 资料个人空间短消息加为好友

小中大

想电泳后蛋白仍有活性所以样品不加热,也不加巯基乙醇
电泳后到底是亚基还是整个蛋白的分子量?

duoduo[使用道具]
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发表于 2014-6-17 16:54 资料个人空间短消息加为好友

小中大

能跑出条带，我是在加入loading buffer （不含巯基乙醇
）后，室温下放置30min，再上样电泳的。
电泳后是整个蛋白的分子量。

lxh031[使用道具]
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发表于 2014-6-17 16:55 资料个人空间短消息加为好友

小中大

没有问题。即使刚和loading buffer （不含巯基乙醇）混合，马上上样也没有问题。

summerxx[使用道具]
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发表于 2014-6-17 16:55 资料个人空间短消息加为好友

小中大

SDS电泳后，蛋白质失活了吧，没有活性了，只有重新使其重新复活才行，我说得对吗？

moonlight45[使用道具]
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发表于 2014-6-17 16:56 资料个人空间短消息加为好友

小中大

想电泳后蛋白仍有活性所以样品不加热,也不加巯基乙醇
电泳后到底是亚基还是整个蛋白的分子量?

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要想有活性，要跑native gel, 不能加SDS。

831226[使用道具]
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发表于 2014-6-17 17:02 资料个人空间短消息加为好友

小中大

请问, 哪里有native gel的相关知识啊,谢谢!

plaa[使用道具]
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发表于 2014-6-17 17:03 资料个人空间短消息加为好友

小中大

加SDS可以的,也可以后活性的,复性一下,用2.5%的Triton100室温半小时即可.

qhyu[使用道具]
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发表于 2014-6-17 17:03 资料个人空间短消息加为好友

小中大

可以跑出带，但是条带不太好看啊，看你是什么用途了。

jujuba[使用道具]
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发表于 2014-6-17 17:05 资料个人空间短消息加为好友

小中大

如果你是想要活性,最好是用native-PAGE方法,这样跑出来的蛋白基本上能保持活性,加SDS变性后再复性效率很低,活性很难恢复过来.但native-PAGE的条件很难控制,控制的好跑出来的效果可以和SDS相媲美!