【求助】各位在做18cm 3－10的时候一向条件都是什么样的？

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标题:【求助】各位在做18cm 3－10的时候一向条件都是什么样的？

guagua[使用道具]
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发表于 2014-6-17 17:11 资料个人空间短消息加为好友

小中大

如题，我想参考一下，因为我觉得我的条件有问题
我的条件是：
250v 30min
1000v 2h
10000v 5h
10000v 60000vh
大家看看我的这个条件是不是有点不合理？

mamamiya[使用道具]
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发表于 2014-6-17 17:11 资料个人空间短消息加为好友

小中大

没有什么不合理的。
主要看你的样品，如果大分子量的蛋白多，就应该聚焦时间长一点（>80000vhr)，如果盐份多，脱盐时间稍微长点。都是根据自己的试验来作调整的。

PINK[使用道具]
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发表于 2014-6-17 17:19 资料个人空间短消息加为好友

小中大

楼主水化时间是多少啊？一般水化12-14h，主动被动都可以。
然后，就是这个IEF程序电压升得太快，无论是快速还是缓慢升压恐怕都不太适合，应该考虑在1000-10000v这个范围多设几个电压梯度，从本人的经验来看，这个程序上不了10000v。
另外，可以在末尾设一个低电压使蛋白质保持在聚合状态。
祝实验顺利！

guagua[使用道具]
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发表于 2014-6-17 17:19 资料个人空间短消息加为好友

小中大

水化12h
是能上到10000v的
我只是觉得这个程序是不是VH数太高了?VH>100000了

lxh031[使用道具]
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发表于 2014-6-17 17:20 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我们是的
30v 6h
60v 6h
200v 1h
500v 1h
1000v 1h
8000v 0.5h
8000v 50000vh
但最后升压过程总是只能达到7900左右，达不到8000...希望能跟大家讨论！

yapuyapu[使用道具]
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发表于 2014-6-17 17:20 资料个人空间短消息加为好友

小中大

电压上不去最大可能就是盐离子。我建议的参数：
0v 重泡胀 1h；
30v 10h； step-on-hold
500v 0.5h；step-on-hlod
2000v 0.5h；Grediant
5000v 0.5h；step-on-hold
8000v 跑至 80000vhs，多设一点时间 20h。
低电压除盐，中间一步Grediant，是为了保险起见，直接升压也可以。

guagua[使用道具]
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发表于 2014-6-17 17:21 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我感觉我的总VH数过高了，正在做
250v 30min
1000v 1h
10000v 1h
10000v 50000vh
不知结果如何
有大侠说，vh数高了会产生横纹，同时也会产生纵纹
横纹能理解，是因为电渗，纵纹怎么理解？

yapuyapu[使用道具]
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发表于 2014-6-17 17:21 资料个人空间短消息加为好友

小中大

18cm胶条上到80000vhs，不算高。50000vhs有点低。
纵纹的产生和样品溶解不好或者由不溶性颗粒造成的。

fsdd817[使用道具]
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