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标题:【求助】关于竖条纹的问题

xiaoxiaoniao[使用道具]
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发表于 2014-6-17 17:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】关于竖条纹的问题


请教大家为什么我的胶总是在相同的位置出现竖条纹阿，每回跑不同的样都出现，实在找不到原因了，大概位置在弱酸到碱性区域之间，分析不是DTT造成的原因。请大家帮忙分析一下。
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xiaoxiaoniao[使用道具]
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发表于 2014-6-17 17:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
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junhun[使用道具]
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发表于 2014-6-17 17:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

据说是蛋白质沉淀的原因
尤其在冷冻后上样
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xiaoxiaoniao[使用道具]
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发表于 2014-6-17 17:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
那应该怎么样消除？
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mimili_901[使用道具]
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发表于 2014-6-17 17:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

个人认为是盐离子浓度过高导致的
1 你在一向升压的时候设置低电压在100-150 伏2个小时
2 应该不是DTT的问题
3 看图像不光是两端有竖条纹，在平衡时可多加一些SDS
4 不知你用TCA-丙酮洗过没有吸了几次，可增加吸的次数
祝好运
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发表于 2014-6-17 17:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

两端的竖条纹是不可避免的，因为那是电极所在位置。
其实你应该更多关注你中间的竖条纹，比较严重。你中间的竖条纹出现原因可能是：
1、上样量太大。
2、操作过程中不慎碰到了胶面。
3、你这张胶很明显制的不均匀，中间都扭曲了。
对了，你使用的莫非是线性ipg胶条？
以上愚见，仅供参考。
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发表于 2014-6-17 17:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

不是胶不均匀，是聚焦不好，看样子是线性胶条做的，试一下非线性看看
先优化一下聚焦参数吧，
蛋白溶解不充分或有不溶性颗粒也会产生竖条纹
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发表于 2014-6-17 17:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

个人经验,竖条纹往往与不溶性杂质有关,在加入水化液上样前,高速10000g离心二十分钟,再上样,可能会有不错的结果.
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kswl870[使用道具]
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发表于 2014-6-17 17:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可能原因及其解决方案:
1.平衡时间不够,增长平衡时间,12-15min,两步.
2.电渗透造成,平衡液中是否包括30%甘油,6M尿素,SDS;在第二向时吸掉胶条两端过多的水.
3.电泳缓冲液有问题,准备新鲜的buffer.
4.buffer的SDS不够,0.1%w/v SDS.
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发表于 2014-6-17 17:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

在跑一向时的样品盐离子浓度可能过高，导致竖条纹的出现，还有就是不溶性物质的存在
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