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标题:【求助】全波长扫描的问题??

yes4[使用道具]
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发表于 2014-6-18 10:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】全波长扫描的问题??


下图第一个是牛血清蛋白的200-300nm扫描图
好像最大吸收波长不在280nm
而且在240nm后的那些峰是怎么回事?
我扫了另外几个样品,都是在200附近出现许多奇怪的峰
本来这些样品应该在260附近最大吸收的,
别的位置也没有最大峰我就只选料一部分上传
是因为这台机子只能扫倒190nm的缘故吗?
还是因为这台Perk-Elmer的机器有点老了?
型号没记住,软件:uv-winlab


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发表于 2014-6-18 10:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我扫了另外几个样品,都是在200附近出现许多奇怪的峰
本来这些样品应该在260附近最大吸收的,
这几个样品的图


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发表于 2014-6-18 10:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

其实通常意义上说的蛋白在280nm有吸收峰是一个均衡的值，大多数蛋白在这个波长有吸收峰，并不是说在其他波长就没有吸收峰了
象多肽，很多都在220。235nm这样的波长有吸收，而在280却没有吸收的。
所以好的层析检测仪和工作站是多波长同时监测的
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yes4[使用道具]
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发表于 2014-6-18 10:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

呵呵,谢谢
我也知道蛋白不是只有280吸收,不过我以为常用来做标准的牛血清蛋白是的?
关键的问题是牛血清蛋白还有我的那几个分子量4万多的蛋白都在200附近出现许多奇怪的峰.
1,这正常吗?
2,是因为仪器问题?
3,我的蛋白为何在260-280附近都没有吸收峰?小峰都没有
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发表于 2014-6-18 10:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你用的比色皿是石英的吗？进口国产的？
很多国产的比色皿虽然说是石英的，但是实际上是很粗糙的石英，在290nm以下有很多杂峰，我们现在实验室就是这样的。但是我读研究生时候用的比色皿是进口的，一对大概2000块钱左右，做杯空白全波长扫描就没有杂峰。我做过牛血清白蛋白的波谱，在280nm左右有吸收峰
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fei1226com[使用道具]
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发表于 2014-6-18 10:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
呵呵,谢谢
我也知道蛋白不是只有280吸收,不过我以为常用来做标准的牛血清蛋白是的?
关键的问题是牛血清蛋白还有我的那几个分子量4万多的蛋白都在200附近出现许多奇怪的峰.
1,这正常吗?
2,是因为仪器问题?
3,我的蛋白为何在260-280附近都没有吸收峰?小峰都没有
......

==============================================================================

既然知道其他波长下也有吸收峰，那不是很明了了么？
还可以看峰型，一般正常的峰是柔和的曲线，如果是突上突下，还有可能是检测池里有异物或者气泡。
280有吸收峰，按理如果用275也应该有吸收峰的，如果在275没有吸收，那可能是机器的问题了
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发表于 2014-6-18 10:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢
异物或者气泡应该不会有的
明天扫描高纯水看看,
恐怖,担心硬件的问题
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kuaizige[使用道具]
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发表于 2014-6-18 10:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

是测试的机子系统软件不稳定,参考说明书调一下软件设置应该就可以了!
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