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标题:【求助】请问我跑蛋白电泳为什么条带拉不开啊？！

junjie05[使用道具]
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发表于 2014-6-18 10:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】请问我跑蛋白电泳为什么条带拉不开啊？！


各位大虾，小弟的实验室最近新换了一套BIO-RAD的电泳系统，本想应该更好用的，可是用新的系统跑出来的胶总是出现条带拉不开的问题，而且我的最小的一个26KD的蛋白也仅仅能跑到胶的三分之一多一点，也就是说条带都挤在上面。我用的是12％的分离胶，衡压100V，跑到溴酚蓝出胶都不能把条带拉下来。我怀疑是电泳液或者是缓冲液有问题，可是全部换了新的以后还是不能改善。请哪位高手指教一下，是不是我的电泳系统要做一些改变？万分感谢！！
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lixi559[使用道具]
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发表于 2014-6-18 10:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
有没有marker？marker跑得怎么样？最好有个图看看
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PINK[使用道具]
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发表于 2014-6-18 10:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

电泳系统一般无关的，估计还是电泳buffer或者凝胶配制的问题，你仔细检查一下相关buffer的配方，包括各种试剂的加样量，虽然你重新配制试剂了，但是如果你的配方有误，结果还是一样的。
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wmp1234[使用道具]
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发表于 2014-6-18 10:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们实验室也一直在用BIO-RAD的电泳系统，没有什么问题，可能还是电泳缓冲液的问题吧
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33号[使用道具]
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发表于 2014-6-18 10:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

最小分子量是26KD，12％分离胶好象不合适。用10％的。另外把凝胶贮液以及Buffer重新配制一下。
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ritou1985[使用道具]
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发表于 2014-6-18 10:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你可以到cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=6110478&sty=1&tpg=1&age=0')看看！
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发表于 2014-6-18 10:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

BIO-RAD的电泳系统是非常好用的啊
我建议你把胶的浓度降低到10%
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junjie05[使用道具]
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发表于 2014-6-18 10:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
感谢各位的帮助，我们把所有的试剂都配了新的，可结果还是这样，marker的条带没有拉开，全都挤到上方，真搞不懂是为什么了。
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abc816[使用道具]
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发表于 2014-6-18 10:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你用的tris-hcl的PH值是不是过高了
应该把PH值校准
还有你的sds是不是还好用?
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yayya[使用道具]
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发表于 2014-6-18 10:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

个人感觉是胶浓度太大了，换小点试试！
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