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标题:【求助】DS-PAGE胶凝的太快，无限苦恼中

bongte[使用道具]
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发表于 2014-6-18 15:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】DS-PAGE胶凝的太快，无限苦恼中

请教各位：
我制胶的时候胶凝的太快，分离胶15分钟，浓缩胶2分钟左右.梳子都来不及插。
15ml体系水 5.9，ML
ACR储存液 5，
1.5Mtris 3.8，
10％SDS 0.15,
10%AP 0.15,
TEMED 0.006
不知道是哪里出了问题.
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NBA[使用道具]
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发表于 2014-6-18 15:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #1 bongte 的帖子

有段时间做AFLP，灌着灌着胶就凝了让我苦恼异常。。。
几点小建议吧：
1 适当降低AP的浓度。
2 现在温度越来越高了，胶凝得也快。所以想办法降低一下室内温度或者胶的温度吧。
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发表于 2014-6-18 15:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

在SDS-PAGE胶中AP是交连剂
TEMED是促凝剂
胶凝的太快,可以适当减少二者的用量
尤其是TEMED
至于适合的量是多少,需要你根据实验室条件进行摸索
DOOD LUCK!!!
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发表于 2014-6-18 15:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

还可以，跟我的时间差不多，你可以先插梳子后灌胶！没有任何问题！
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发表于 2014-6-18 15:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我以前在实验中遇到过这样的问题。凝胶的速度比你的还快，还没有来得及灌浇就凝了。后来发现，我的Tris缓冲液的PH值太高了，调整ph值以后就好了，如果你的问题还没解决的话，可以检查一下你的TrisPH值。这是个人经验，不知道是什么原因。
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发表于 2014-6-18 15:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

查查缓冲体系的pH值吧，我配胶的时候，8ml体系中加入10UL的TEMED还没你凝的这么快的。另外，操作尽量快，准。
祝好运！
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发表于 2014-6-18 15:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

tris的pH请严格控制在8.8，不然可能出现的问题还不止胶凝聚太快，还可能导致交联度的不足。曾经遇到过一次，12%的胶连30kd的蛋白都无法分离出来，全部和loading buffer一起，分离不出来
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langlang[使用道具]
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发表于 2014-6-18 15:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

TEMED 0.006
有点多
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huifeng0516[使用道具]
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发表于 2014-6-18 15:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

胶凝的太快肯定不是好事!
1.检查Arc
2.检查APS
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ero11[使用道具]
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发表于 2014-6-18 15:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

也可能胶配好后，没有混匀阿
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