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标题:【求助】怎么去除菌体破碎后上清的颜色

docsy[使用道具]
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发表于 2014-6-18 16:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】怎么去除菌体破碎后上清的颜色


各位高手，小弟遇到一个棘手的问题。菌体破碎后的上清通过阳离子交换树脂后，呈淡黄色，请问用什么方法可以将其去除。
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IAM007[使用道具]
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发表于 2014-6-18 16:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

上样前呈淡黄色吗？
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docsy[使用道具]
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发表于 2014-6-18 16:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
对，上样前是亮黄色，通过阳离子树脂可以使颜色变淡，但是洗脱液还是呈淡淡的黄绿色。浓缩结晶后，有黄色的东西。不知道怎么处理。请princessann及大家帮忙。
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wmp1234[使用道具]
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发表于 2014-6-18 16:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

为什么要祛除这些颜色呢，难道它对你的目的蛋白检测有什么显著的影响吗，没有的话可以不去管他，我认为。
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glass[使用道具]
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发表于 2014-6-18 16:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

根据你的描述觉得是细胞破碎时可能破碎的不够彻底引起的。可以适当延长破碎时间。或者离心后再加一步过滤步骤。
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yjf1026[使用道具]
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发表于 2014-6-18 16:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你的宿主是大肠杆菌还是酵母呢？
不妨样品在纯化之前或之后做一下透析或超滤，进行缓冲液置换，可以去除一部分有色杂质
通过离子交换必然会吸附色素，也和蛋白一起洗脱下来。工业上脱色方法一般是活性炭的。
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ladyhuahua[使用道具]
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发表于 2014-6-18 16:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

是啊，这颜色对纯化目的蛋白又没有什么影响，为什么要除去它呢？
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lxh031[使用道具]
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发表于 2014-6-18 16:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

不知道你的菌体是什么菌体？至少说明你的色素还没有除好，应该考虑在过几个例子层析柱，就可以了
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docsy[使用道具]
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发表于 2014-6-18 16:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢各位。我要的是短肽，要求脱色干净。我用的酵母菌，破碎后，上清过离子交换柱。洗脱液有黄绿色。发酵上清先已经离心去除了，色素是由于破细胞引起的，是胞内的未知的东西。请大家帮帮忙。
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qqq111[使用道具]
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发表于 2014-6-18 16:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
酵母表达会形成黄色色素和绿色色素，一般分子量在5K一下不等，你的是胞内表达，色素会少很多，另外培养基残留、细胞代谢物也会存在有色物质。用超滤是个比较合适的方法，纯化前、纯化后使用都可以，可以采用膜包或超滤离心管。关键是选择超滤膜的截留范围。一般比你的目标蛋白小1/3的孔径的膜，可以保证较大的收率，所以如果你的蛋白分子量接近色素的话，超滤就不合适了。胞内表达的话，可以采用离子交换，阴离子交换会吸附较多的色素。
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