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标题:【求助】蛋白质电泳

eric930[使用道具]
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发表于 2014-6-18 16:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】蛋白质电泳


各位大虾，我最近在做SDS-PAGE这一块，前面的几次试验较为顺利，可是最近做的PAGE电泳，所有的电泳条带都跑的很靠前（10%），胶的浓度没有什么变化，溶液冲洗配置后仍然这样。前期的时候电泳用的时间比较长，而现在一般2H即可完成，使用的是MINI系列电泳仪
望各位指点迷津
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kuohao17[使用道具]
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发表于 2014-6-18 16:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可能是你以前的样品分子量大，现在的样品分子量稍小，你把凝胶浓度调到12%试一下，还有可能是tris-HCL 的PH低了，会延长电泳时间。
电极缓冲液要新鲜配制，使用不超过三次
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DONT[使用道具]
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发表于 2014-6-18 16:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

电泳时间短和温度有直接关系。我的也是这样，把电泳缓冲液使用前放在4度里，跑电泳时别忘了冷凝。
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eric930[使用道具]
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发表于 2014-6-18 16:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我的不只是时间短，而且几乎所有的带全都跑到前面2CM左右的范围内，拉不开（带白质的分子量与前几次的是一样的）
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nn255[使用道具]
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发表于 2014-6-18 16:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你的样品是什么样的啊??
煮后离一下试试
你的槽子没有短路现象吧?
tris-HCL pH是否正确?
冷凝系统良好?
祝实验顺利!!!
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xue258[使用道具]
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发表于 2014-6-18 16:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

电泳这方面应该不会出什么问题，应该是样品制备的问题，如果tris-HCL pH不对的话，marker也应该跑不开。
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eric930[使用道具]
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发表于 2014-6-18 16:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢各位，我估计可能是温度太高
正在进行实验，结果出来后告诉大家
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yes4[使用道具]
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发表于 2014-6-18 16:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

被忽视的问题:
电源-----有时候不能总是相信它屏幕上显示的数字!
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eric930[使用道具]
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发表于 2014-6-18 16:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

问题依然没有解决，电泳时间和她没有关系，依然是 前沿的蛋白质带十分集中
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orangecake[使用道具]
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发表于 2014-6-18 16:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

加大凝胶浓度到12%试了没有？
再有就是你的目的蛋白分子量是否低于10KDa？如果是那么建议你跑tricine-sds-page。
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