【求助】如何提取二维电泳后感兴趣的目的蛋白？

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标题:【求助】如何提取二维电泳后感兴趣的目的蛋白？

lagua123[使用道具]
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发表于 2014-6-18 16:56 资料个人空间短消息加为好友

小中大

如何提取纯化出二维电泳后看出的感兴趣的目的蛋白？我需要做功能实验。
说明：我的蛋白样品量很少。
希望各位相助~！

fei1226com[使用道具]
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发表于 2014-6-18 16:58 资料个人空间短消息加为好友

小中大

用小枪头小心把蛋白挑出来，送去打质谱，就可以知道蛋白是什么，但是质谱有时候成功率低，而且也比较贵。

ladyhuahua[使用道具]
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发表于 2014-6-18 16:58 资料个人空间短消息加为好友

小中大

最重要的是我现在要把这个蛋白从我的蛋白混合体系中纯化分离出来，我需要去做功能实验。仅仅知道目的蛋白是什么是不够的。
请问有什么好的方法么？是不是只有凝胶过滤层析啊？
但是我的样品量很少~~~

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发表于 2014-6-18 16:59 资料个人空间短消息加为好友

小中大

在下的建议,仅供参考:
1.知道了蛋白的身份,还要做功能实验,就没有必要在跑2D了,而且样品经过一次2DE,又从胶内分离出来,肯定存在损失或修饰,再做功能实验,肯怕比较的棘手.
2.个人认为好的方法是直接从混合样本中根据目的蛋白的特性做高效液相色谱将其分离出来,再做功能实验.
3.样品少,我想没有什么好的方法,多富集你的目的蛋白了,实验过程小心谨慎!
楼主好运!

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发表于 2014-6-18 16:59 资料个人空间短消息加为好友

小中大

楼主的问题太笼统了，蛋白纯化是一个很复杂的工艺流程，取决于你的蛋白来源和目的蛋白的理化特征

lagua123[使用道具]
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发表于 2014-6-18 16:59 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我的蛋白是用无血清培基收的细胞培养的上清，经过二维电泳后，发现了很多感兴趣的蛋白点，想从混合的蛋白中分离出二维电泳后所看到的感兴趣的蛋白做功能试验！其中重要的一点就是保证蛋白不变性！
由于样品量少，加上上清中蛋白成分复杂，用HPLC的方法恐怕不行，大家还有什么高招？

3648755[使用道具]
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