小中大谢谢!!!
1. 胶上颜色左右两边确实有分界,因为IEF结束时,在胶的中间偏酸性端有一个鼓包,很明显的凸起,鼓包的位置就在图上分界线处,应该与这有关系。不知道为什么,IEF总是出现胶中间鼓包的现象,别人有遇到么?有什么解决的办法?
2. 琼脂糖的问题我倒是没有考虑到,会不会跟上槽缓冲液污染有关呢?
3. 我今天用TCA-丙酮沉淀处理样品,可是沉淀了8个小时,看不到任何的沉淀,但我单独加丙酮却能很明显的看到沉淀出现。我用的是含10%TCA和20mMDTT的冷丙酮,TCA购买时间很长了,跟这有关么?
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胶的中间偏酸性端有一个鼓包,很明显的凸起,我想大概有两个原因:
1.水化不均匀,加完样品,放置胶条后,再轻轻提起胶条,然后慢慢放下,重复两三次,保证槽子里的样品分布均匀,再仔细检查一下,如果发现胶条的某一段样品浸润不够,用干净的枪头拨匀,加覆盖油也要尽量均匀.
2.胶条有问题,按照楼主的说话,这种可能性很大,我也遇到过,那就只能换胶条了,没有别的办法.
另外楼主说丙酮处理后的样品用什么复溶,我用的是裂解液或水化液!
楼主好运!