【求助】帮我分析分析我的奇怪结果

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标题:【求助】帮我分析分析我的奇怪结果

ququer787[使用道具]
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发表于 2014-6-18 17:38 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我做的western　blot，条件：12%的分离胶, 4%浓缩胶, bio-rad电泳仪, 恒压150v, 约1小时; 侵入式电转移, PVDF膜, 电压100v, 300mA, 1.5小时; 5%脱脂奶粉封闭1.5小时, 1:1000一抗4度孵育过夜, 1:1000二抗孵育1.5小时; Lumiglo发光, 曝光1分钟, 显影1分钟, 定影10分钟. 图象出来了: 我的目的带为40-50之间, 但50-60之间每个样本都有一强的条带, 不知是什么, 问了几个人, 也不清楚, 现求助丁香圆内高手, 希望尽快得到答案哦, 谢谢了.(我没有加actin的抗体, 故已排除actin的可能)

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2014-6-18 17:38

14621559.jpg (78.04 KB)

glass[使用道具]
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发表于 2014-6-18 17:38 资料个人空间短消息加为好友

小中大

是不是封闭的问题，我猜的。

小糖块[使用道具]
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发表于 2014-6-18 17:39 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 ququer787 于 2014-6-18 17:38 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

我做的western　blot，条件：12%的分离胶, 4%浓缩胶, bio-rad电泳仪, 恒压150v, 约1小时; 侵入式电转移, PVDF膜, 电压100v, 300mA, 1.5小时; 5%脱脂奶粉封闭1.5小时, 1:1000一抗4度孵育过夜, 1:1000二抗孵育1.5小时; Lu ...

b-actin是42KD，根本不会在50-60kd处有这么浓密的条带
你的程序没问题
你做了几遍？如果每次做都有这么一条强带的话，估计是一抗的特异性问题，与另一种蛋白也能发生非特异性结合。封闭是封闭不住显色这么强的条带的。

ququer787[使用道具]
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发表于 2014-6-18 17:39 资料个人空间短消息加为好友

小中大

回复 #3 小糖块的帖子

谢谢您，我做了好3-4遍都有这样的问题，我也怀疑是抗体问题，但一直不能肯定，想请教一下，IgG的分子量是否在此附近？

moonlight45[使用道具]
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发表于 2014-6-18 17:40 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 ququer787 于 2014-6-18 17:39 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
谢谢您，我做了好3-4遍都有这样的问题，我也怀疑是抗体问题，但一直不能肯定，想请教一下，IgG的分子量是否在此附近？

IgG的重链大约50kD

ququer787[使用道具]
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发表于 2014-6-18 17:40 资料个人空间短消息加为好友

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