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标题:【求助】IPTG粉末是如何保存的？

seven7[使用道具]
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发表于 2014-6-18 17:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】IPTG粉末是如何保存的？

我现在用pet28a表达蛋白分子量大约为42KD的蛋白，刚开始能表达出来，后来就表达不出来了，试过很多温度和IPTG的浓度都不行，质粒拿去重新测序都是好的。现在怀疑是不是IPTG有问题，我的IPTG是购自生工的，粉末是保存在４度冰箱里的，配出的液体是存放到－２０度冰箱里的，这样保存会不会有问题啊？急急急
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wu11998866[使用道具]
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发表于 2014-6-18 17:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们实验室的IPTG一般是粉末和配置好的溶液都保存在-20度
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bring[使用道具]
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发表于 2014-6-18 17:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

IPTG这样保存没问题，我们也用生工的，我估计不是IPTG的原因，可能是基因本身的原因。我也碰到两例这种情况，具体原因还没找到。建议重新转化新的表达宿主菌（其它实验室的），最好有个阳性对照（其它可表达的质粒），重复实验一次试试看了。如果没表达，可能就不好办了。我也在查找原因之中
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seven7[使用道具]
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发表于 2014-6-18 17:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我们实验室就我自己在做啊,没有阳性对照,他们有的说是N端信号肽的问题,切掉就好了,不知道说的是什么意思?
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tuuu2[使用道具]
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发表于 2014-6-18 17:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

同问，我也是遇到了这样的问题：基因导入pET载体中，但就是不表达目的蛋白……为什么呢？
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mimili_901[使用道具]
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发表于 2014-6-18 17:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
如果你的序列中有信号肽序列，那就应该先把信号肽去掉，到NCBI中查一下你的序列信息或用软件预测一下序列的信号肽。一般来说，信号肽如果存在会影响在原核中表达的。
信号肽分析：cuturl('http://www.cbs.dtu.dk/services/SignalP/')
试试看喽！
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mimili_901[使用道具]
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发表于 2014-6-18 17:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

影响基因表达的因素很多，首先在ORF正确，基因测序正确的前提下，看看基因的是否存在稀有密码子，5‘端的二级结构。如果是用PET载体，试试Roseta序列的宿主菌。如果还是不行，看看融合表达行不，基因如果不表达的确很耗时间啊
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