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标题:【求助】为什么蛋白低分子量marker总是少一条带？

kuaizige[使用道具]
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发表于 2014-6-18 17:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】为什么蛋白低分子量marker总是少一条带？


各位高手，我用的是Bio-Rad的低分子量蛋白标准，但按说明书操作进行处理后进行SDS-PAGE电泳，已经作了很多次了，marker总是出现五条带（12%的胶），而10%的胶只能出现四条带。请问哪位用过Bio-Rad的产品，有没有遇到过类似的情况啊？急待回音，谢谢！
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发表于 2014-6-18 17:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我想问一下，是不是最下面的那一条带没有呢？
多数人跑胶下面的条带都由于这样那样的原因跑不出来，所以我想多数不是marker的原因，而是跑胶的问题。
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windy+++[使用道具]
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发表于 2014-6-18 17:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我觉得是最后一条带蛋白已经跑出去了。如果loading buffer中的溴芬兰跑出去的话， 低分子量蛋白可能也跑出去了，可以试试在溴芬兰跑到底之前0.5厘米停止，或者是用三层胶SDS-PAGE
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小游abc[使用道具]
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发表于 2014-6-18 17:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

多数情况都不是marker的问题
跑胶的时候，小分子的那条marker和溴芬兰不容易分开的
也有可能是分离胶所用的Tris－HCl的pH值不准确导致的，不过这种情况是好几条marker都无法分开。曾经有一次我们的试验就出现这个结果，用的12％的胶下面3条marker都没有分开来，而正确的pH条件下，10％的也是可以把所有marker都跑开的
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小游abc[使用道具]
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发表于 2014-6-18 17:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

多数情况都不是marker的问题
跑胶的时候，小分子的那条marker和溴芬兰不容易分开的
也有可能是分离胶所用的Tris－HCl的pH值不准确导致的，不过这种情况是好几条marker都无法分开。曾经有一次我们的试验就出现这个结果，用的12％的胶下面3条marker都没有分开来，而正确的pH条件下，10％的也是可以把所有marker都跑开的
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wmp1234[使用道具]
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发表于 2014-6-18 17:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这种问题我也遇见过，一般厂家得广告都是用的预制得梯度胶，效果当然好了，那些低分子量得也能跑开，而我们在实际实验中很难用到梯度胶，这样经常最低分子的回跑不出来
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131415[使用道具]
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发表于 2014-6-18 17:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我在作PAGE时，也出现过这样的问题，没有出现的 maker带在溴芬兰中，没有跑开，而不是跑出去了，有时有4条，有时有5条，有的时候只有3条，根据我的经验，用10%或12%的胶都是可以的，但不知你用的是哪种电泳仪，最好速度稍慢一些，电流控制在30mA以内，小胶的话跑2个多小时可OK，另Tris的PH一定要准确。
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wood533[使用道具]
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发表于 2014-6-18 17:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们实验室用的是这一品牌的电泳仪和低分子量Marker.
用12%的胶一般都能出现六条的,要么是配胶缓冲液有问题.如果其它没问题,提高胶浓度到15%肯定能出来.
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wsll[使用道具]
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 小中大

你换一个厂家的marker试试不就知道是什么原因了吗？也许是marker本身的问题呢？
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ladyhuahua[使用道具]
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发表于 2014-6-18 17:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

如果是最后一条带没有了，，提高一点分离胶的浓度就行了
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