【求助】血清蛋白跑SDS-PAGE应该怎么处理样品

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标题:【求助】血清蛋白跑SDS-PAGE应该怎么处理样品

viviwang1987[使用道具]
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发表于 2014-6-19 09:38 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我要血清中的一种12K的蛋白，含量大概为10－20ng/mL，我想跑page，然后做western。但是样品跑不出来，煮沸的话样品凝集，不煮的话跑出来就是一大片。请高手提示，样品应该怎么处理好。

zwsyrt[使用道具]
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发表于 2014-6-19 09:41 资料个人空间短消息加为好友

小中大

煮沸的话样品凝集?我从来没有碰到过这个问题啊，虽然血清蛋白做的不多．
有一种柱子专门除去血清中的高丰度蛋白，你可以考虑过完这个柱子后再走ｐａｇｅ胶

XYZQ[使用道具]
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发表于 2014-6-19 09:41 资料个人空间短消息加为好友

小中大

血清跑page？稀释50或100倍先，加入loading buffer变性，这时由于浓度变稀，就不会凝集了。完了再取10ul上样就行了
不过你蛋白的丰度有点低

redbutterfly[使用道具]
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发表于 2014-6-19 09:42 资料个人空间短消息加为好友

小中大

这么低丰度的目标蛋白在高蛋白丰度的血清样品中确实很难做，应该做预处理纯化样品并提高目标蛋白的丰度。建议可用截留分子量为50KD的离心超滤管除去高分子量蛋白，再用截留分子量为3KD的离心超滤管除去低分子量物质（血清中存在的大量盐份可干扰电泳）并浓缩样品，最后再进行分析。

viviwang1987[使用道具]
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发表于 2014-6-19 09:42 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我的血清样品是大量的，如果跑柱子的话，我感觉意义就不是很大了。
如果我把样品稀释50呗的话，那我那么低的蛋白含量还能跑出来么
还有就是我跑胶跑的不好的话，可以接着做western么

huifeng0516[使用道具]
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发表于 2014-6-19 09:43 资料个人空间短消息加为好友

小中大

这么低丰度的目标蛋白在高蛋白丰度的血清样品中确实很难做，应该做预处理纯化样品并提高目标蛋白的丰度。建议可用截留分子量为50KD的离心超滤管除去高分子量蛋白，再用截留分子量为3KD的离心超滤管除去低分子量物质（血清中存在的大量盐份可干扰电泳）并浓缩样品，最后再进行分析。

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目前我也在为这件事情苦恼
我也要做30左右ng/ml的蛋白。。WB和ECL号称pg级都能做出来，试试看

mimili_901[使用道具]
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发表于 2014-6-19 09:43 资料个人空间短消息加为好友

小中大

可以将血清蛋白样品稀释１０倍后跑电泳效果应该还可以．
另外，使用超滤管处理也是不错的方法，可以试一试，方法都不难，不需要耗费多少时间和资金的．

huifeng0516[使用道具]
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发表于 2014-6-19 09:43 资料个人空间短消息加为好友

小中大

超滤管360块8个。。不算贵了。。

duoduo[使用道具]
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