【求助】SDSPAGE电泳图辨率很差是什么原因？

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标题:【求助】SDSPAGE电泳图辨率很差是什么原因？

coolcool[使用道具]
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发表于 2014-6-19 13:22 资料个人空间短消息加为好友

小中大

各位大侠，请帮忙看一下SDSPAGE电泳图，分辨率很差。跑的过程中溴酚蓝带很宽，没有压成一条细线。
我以前跑的很好的，最近一个月都是这样着急死了！

附件

2014-6-19 13:22

12491114.jpg (35.99 KB)

plaa[使用道具]
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发表于 2014-6-19 13:23 资料个人空间短消息加为好友

小中大

胶浓度多少？若低于10%建议试试高浓度，如12-15%。
也可能是温度，冷凝系统怎样？天气开始热了，冷凝若使用自来水需要开大点了。
制胶分离胶部分分界面平不平？看你的图好像分界面就不平，可以试试加完分离胶后用异丙醇封胶，用水封容易在两端稍微下陷。
还有你跑的电压是多少？我用的Amersham的，浓缩胶60V，分离胶130v，效果不错的，你可以摸摸条件。
还有样品，会否浓了？不过看你最左边一道是Marker吧？已经不好了，可能性不大。
当然还会有许多影响因素，你给的资料不太全，建议先试试这几项，供参考。祝好运！

coolcool[使用道具]
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发表于 2014-6-19 13:23 资料个人空间短消息加为好友

小中大

胶浓度是12％，感觉胶比以前凝得快了，具体时间没有注意到。
电泳要冷凝，还是做胶要冷凝？
分离胶是平的了，可能拍照的时候倾斜了。
我跑浓缩胶80v，分离胶120v，以前跑得很好的呀！
样品也不浓，Marker都没有跑好，分辨率奇差！

plaa[使用道具]
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发表于 2014-6-19 13:24 资料个人空间短消息加为好友

小中大

跑电泳时一般都用循环水冷凝，若是用低温循环水浴一般问题不大，但使用自来水循环的话就会和天气有些关系了，可以试试放到冰上跑或干脆放到冷库里跑。
还有现在用的loading buffer、Tris(pH6.8)等缓冲液是否pH不准了，主要就是靠这几个pH的不同来跑胶吗，若不准了也有可能会弥散。

linlinstar[使用道具]
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发表于 2014-6-19 13:24 资料个人空间短消息加为好友

小中大

page胶对温度要求很高
天热的时候要开空调阿
如果你的上样缓冲液用很长时间的话，建议从新配一下，分装，-80度保存

箭头儿[使用道具]
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发表于 2014-6-19 13:25 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 plaa 于 2014-6-19 13:24 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

跑电泳时一般都用循环水冷凝，若是用低温循环水浴一般问题不大，但使用自来水循环的话就会和天气有些关系了，可以试试放到冰上跑或干脆放到冷库里跑。
还有现在用的loading buffer、Tris(pH6.8)等缓冲液是否pH不准了，主要 ...

比较赞同这个观点，以前也出现过这样的问题，后来发现所用缓冲液的pH值出了问题。

PINK[使用道具]
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发表于 2014-6-19 13:25 资料个人空间短消息加为好友

小中大

跑的不齐可能是浓缩胶太短，可适当加长浓缩胶。

wmp1234[使用道具]
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发表于 2014-6-19 13:26 资料个人空间短消息加为好友

小中大

你一直做的很好，现在没有其他原因突然不好了，一般是你的液体出问题了，建议重新配置各种液体，包括制胶的和跑胶的！

dior[使用道具]
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发表于 2014-6-19 13:26 资料个人空间短消息加为好友

小中大

谢谢大家！
我把所有的东西全部自己配制后，电泳正常了。