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标题:【求助】请帮忙分析一下胶图

nvdabing[使用道具]
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发表于 2014-6-19 13:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】请帮忙分析一下胶图


跑2D 17cm胶条一相电压达不到预定的10000v,只能达到7000V 左右，总电压75000vhr。组织提取样品是用丙酮沉淀过夜的除盐，感觉PH4-8段点比较少。 一侧横纹较多。银染时背景较深，不知是否与显色时间有关。请帮忙分析一下有哪些问题，谢谢!


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2014-6-19 13:33
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mimili_901[使用道具]
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发表于 2014-6-19 13:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1.你的胶银染时间过长，点有点发虚,背景深可能是操作时把胶面弄脏的原因，
2.聚焦不好，可能还是盐离子的问题。可以重新考虑一下聚焦参数,在聚焦过程中也可以除盐的.
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nvdabing[使用道具]
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发表于 2014-6-19 13:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我的样品的确有盐分，因为含血管较多，内面有血液可能未冲洗干净，但是我看有的并未用丙酮沉淀，如有国外文献肝脏的蛋白提取。不知什么样的组织需进行除盐。另外银染的显色时间掌握还不好，下次适当减少看看。但这样会有此点未显示出来，我的上样量约为400ug,是否偏大。请各位朋友不吝赐教。
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mimili_901[使用道具]
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发表于 2014-6-19 13:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

上100-120ug就可以了，如果小点显色不明显可以适当在显色液中增加甲醛的量
试一下。4-8段蛋白少，可能和提取方法有关
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nvdabing[使用道具]
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发表于 2014-6-19 13:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢你楼上朋友的建议，但是什么是增加加权的量，能不能说明白的点如何做。
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orangecake[使用道具]
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发表于 2014-6-19 13:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

那位仁兄说的应该是“甲醛”把！
丙酮沉淀可以除去一部分的盐，但聚焦过程中也可通过设定程序来除盐！
还有，银染的背景和一些小点的染出本来就是一个矛盾，有时候要根据你实验的需要取舍！
不知道我说的对不，请各位大虾指正！
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发表于 2014-6-19 13:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

用Cleanup试一下应该能好一点
上样前离心
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yes4[使用道具]
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发表于 2014-6-19 13:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

转速可达5－6万g没有问题
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