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标题:【求助】请帮忙分析这张2D图

windboy[使用道具]
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发表于 2014-6-19 13:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】请帮忙分析这张2D图


细胞培养后的全蛋白2D图，由于横竖纹太多，不知问题出在哪里，新手还请大家帮忙分析


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2014-6-19 13:37
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nn255[使用道具]
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发表于 2014-6-19 13:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你的marker真漂亮，怎么做的哦？请教
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windboy[使用道具]
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发表于 2014-6-19 13:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
maker是在低熔点琼脂糖上做个孔。
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发表于 2014-6-19 13:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你把实验操作过程和数据传上来看一下，从图上不能准确判断，我觉得是聚焦不好，还可能是核酸影响
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xueyouzhang[使用道具]
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发表于 2014-6-19 13:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
可能的原因以及解决办法：一，第二向电泳缓冲液中含有杂质，或者电泳装置不干净，建议使用新鲜配置的电泳缓冲液，并将玻璃板和电泳槽清洗干净；二，琼脂糖固定液含有杂质，建议使用新鲜配置的琼脂糖固定液。
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windboy[使用道具]
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发表于 2014-6-19 13:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我的低熔点琼脂糖的确用了4、5次了，可能有杂质了。我再试试。
我今天把DNase15ul（1mg/ml）和RNase5ul（1mg/ml）处理的样品跑了个EB琼脂糖，在溴酚蓝一线和滞后的地方有大片、很亮的核酸，应该是被消化后的结果吧，但是孔里也还有大分子的核酸，是不是应为这部分核酸的作用？
11cm胶条
水化  50V  14小时（20℃）    主动水化
S1  250V  线性  60分钟    除盐
S2  1000V  快速  60分钟    除盐
S3  8000V  线性  4小时    升压
S4  8000V  快速  50,000伏小时  聚焦
S5  500V  快速  任意时间    保持
设置等电聚焦时的温度。（20℃）
还请各位帮忙
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windboy[使用道具]
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发表于 2014-6-19 13:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

核酸酶加入后只在4度放置了1h，不知道时间够长么？由于没有加其他蛋白酶抑制剂，完全靠8M尿素所以不敢时间太长，温度太高
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