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标题:【求助】PVDF膜可不可以用丽春红染色？要注意什么？？

cbou876[使用道具]
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发表于 2014-6-19 16:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】PVDF膜可不可以用丽春红染色？要注意什么？？


我做western，用PVDF膜，转移后用分子克隆上介绍的丽春红染色法，没有染出条带，但在同样条件下的硝酸纤维素滤膜上染出条带了，请高手指点！！！谢谢！Smile
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yonger[使用道具]
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发表于 2014-6-19 16:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可以染出条带的,你在确认一下你的丽春红的比例是否合适.是不是用的1*的.
其实丽春红的浓度也没有那么严格,我们的都反复用很多次,都没有问题.你可以借用别人的试剂用一下已确认你的丽春红没有问题
你的转膜条件是什么?
有没有问题,还需要确认一下.你转完膜考染一下胶,可以看一下又没有转过去.
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cbou876[使用道具]
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发表于 2014-6-19 16:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢!帮助!我是在bio-rad湿转条件，而且NC和PVDF的转移条件是完全一样的，同时作的。考染胶后，膜覆盖处的蛋白没有了，应该转干净了。
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hold住[使用道具]
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发表于 2014-6-19 16:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

肯定可以用丽春红染色的！1×丽春红染色10分钟左右，但然出的条带的确没NC膜清晰。应该是其他原因，能肯定使用两种膜时条件完全一样吗？PVDF膜转膜时是否对正极？
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remenb[使用道具]
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发表于 2014-6-19 16:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

肯定可以用丽春红染色的！1×丽春红染色10分钟左右，但然出的条带的确没NC膜清晰。应该是其他原因，能肯定使用两种膜时条件完全一样吗？PVDF膜转膜时是否对正极？
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fei1226com[使用道具]
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发表于 2014-6-19 16:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
丽春红是可以,但是时间久了就有可能有问题.
我碰到过丽春红染不出来,再用R250染却可以染出来的情况
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cbou876[使用道具]
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发表于 2014-6-19 16:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢帮助，我用G-R250染过，发现膜全变蓝了，看不出蛋白，不知大家增麽做的，和染胶一样么？是不是要用脱色液洗好久，谢谢！
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u234[使用道具]
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发表于 2014-6-19 16:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
R250只能染几秒钟就要去脱色 时间长不易脱掉
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