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标题:【求助】表达蛋白纯化后SDS-PAGE为一条带，NativePAGE却跑出...

小游abc[使用道具]
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发表于 2014-6-19 16:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】表达蛋白纯化后SDS-PAGE为一条带，NativePAGE却跑出...


诱导表达后，Ni柱纯化，SDS-PAGE电泳结果显示为一条带，17KD左右，但由于表达产物要做功能检测，NativePAGE却能跑出间距相等的三条甚至四条带，请问原因何在？
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fei1226com[使用道具]
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发表于 2014-6-19 16:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
应该是形成了蛋白复合体，dimer，trimer，tetramer之类，
不知道你的蛋白是否有半胱氨酸，可能通过二硫键形成复合体，
如果有，建议你跑一个非还原的SDS－PAGE看看。
至于这种复合体是否具有功能很难说，有必要的话过个分子筛把几个组分分开，分别测测活性。
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小游abc[使用道具]
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发表于 2014-6-19 16:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我的蛋白分子量比较小，刚才检查了一下，内部也没有半胱氨酸，应该没有形成链内或链间二硫键的机会。通过Native-PAGE（凝胶迁移阻滞试验）发现每条带都有活性。猜想可能是蛋白聚体，我找了很久的文献也没有发现相关的报道。不知您或大伙谁有比较有说服力的文章啊？请赐教！
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plaa[使用道具]
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发表于 2014-6-19 16:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

用HP-SEC跑一下看看
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831226[使用道具]
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发表于 2014-6-19 16:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我曾经看到过这么一篇文章,主题是:
某些蛋白可能形成不同的二级结构或者三级结构,导致同种蛋白表现为不同的立体形状,比如:球型, 雪茄型等等.很显然,这两种形状在分子筛和 剃度离心中的表现是不一样.所以,你可以再这个方向上考虑,看看能不能解释你的疑问?
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