小中大今天又跑了一次电泳
把可能存在的问题都排除了
可是结果还是跑得乱七八糟，跟上次的一样
这次的上样量是25ug，25ul左右（减少了近一半的上样量，没有超过xinghan88说的30ul。但是还是和上一次一样，刚进入分离胶的时候溴酚兰压得很细，跑到分离胶的越1/3就开始越来越纵向弥散，我觉得这种弥散跟以前上样量太大导致的溴酚兰压不细是两个完全不同的现象）。
浓缩胶换成了5%（和4%浓缩胶一样，跑得都挺正常的，到分离胶才不行）
浓缩胶的长度也增长了
不过我的浓缩胶100V一般都要跑半个小时的，不晓得kangpingw为什么100V只要7min就行？
检查过胶，没有气泡。
好痛苦啊
救命啊
或者换成12%的胶会不会跑得好看一点呢？
......
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我怀疑胶和玻璃板之间有缝隙。我跑了两块10％的，其中一块，出现了异常。但也只是其中几个条带出现了快速下移。
请问：分离胶的灌胶之后，你用什么压的胶，如果是水的话，换成*醇试试（记不得了，查分子克隆）。我有一次用10％的SDS压的胶（应该是0.1％的SDS），结果胶聚合的不均匀。
另外，检查一下配胶时，SDS的用量和浓度是否正确。是否充分混匀，是否用错缓冲液，过硫酸铵和TEMED是否是最后加入的。用量是否不对（有人和我说过，分子克隆的这两个试剂有可能不对，我没有验证过）。玻璃板是否洗净。和周围跑过15％的人对比一下配胶和步骤。
从结果看，是蛋白泳动的不均匀。可能是胶的问题，也可能是胶底部微小的气泡造成。
我怀疑还是胶的聚合不均匀。可能是凝胶的时间不够，也可能是过硫酸铵和TEMED用量问题，或者未充分混匀。也可能是SDS的过量。4度电泳试试。恒压试试。
哦，对了，拔掉梳子后，有没有冲洗一下上样孔？
