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标题:【求助】为什么我15％的胶跑得这么恐怖啊？

JK.jon[使用道具]
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发表于 2014-6-20 16:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你的marker条带呢?是不是可以试试光跑marker看看条带是否均一,这样就可以排除制胶等方面的问题?

===================

marker就是越跑越宽
条带不太sharp
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gogo[使用道具]
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发表于 2014-6-20 16:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
marker就是越跑越宽
条带不太sharp

==============================================================

恩，我的条带还可以，但MARKER也有越跑越宽的趋势，很郁闷。
应该不是配胶的问题，因为周围很多人都配过，10%,12%,15%,都有这种问题。
望高手予以援手。
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linlinstar[使用道具]
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发表于 2014-6-20 16:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

不知你想没想过是丙稀酰胺的问题，
一般超过15％的胶对丙稀酰胺的要求很高，
试着新配点丙稀酰胺试试怎么样？
丙稀酰胺见光分解为丙烯酸，
时间长了影响电泳。
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发表于 2014-6-20 16:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

还有你的丙稀酰胺是那儿产的了？
买点进口的试试，
可能会有所不同。
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youyou99[使用道具]
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发表于 2014-6-20 16:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们的样品处理液的配方:
3.55ml ddH20
1.25ml 0.5M Tris-Hcl,PH6.8
2.5ml 甘油
2ml 10%SDS
0.2ml 0.5%溴酚兰
9.5ml 总体剂
其它成分混合均匀,用普通滤纸过滤后加甘油
临用前,按9:1加入B-ME.
关于胶凝固不均匀的问题----一定要把各成分混合均匀.
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JK.jon[使用道具]
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发表于 2014-6-20 16:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
恩，我的条带还可以，但MARKER也有越跑越宽的趋势，很郁闷。
应该不是配胶的问题，因为周围很多人都配过，10%,12%,15%,都有这种问题。
望高手予以援手。

====================

我们跑10%的不会
12%和15%会
如何解释可以搜索本版
我发了个帖子问过
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JK.jon[使用道具]
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发表于 2014-6-20 16:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不知你想没想过是丙稀酰胺的问题，
一般超过15％的胶对丙稀酰胺的要求很高，
试着新配点丙稀酰胺试试怎么样？
丙稀酰胺见光分解为丙烯酸，
时间长了影响电泳。
......

================================

嗯，基本可以排除acry的问题...
目前试了一下，12%的胶虽然不好看
但比15%好一些
决定以后就用12%的了
小心一些应该目的蛋白不会跑没了吧
谢谢大家这么热心的解答
丁香园真是个好地方Smile
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linlinstar[使用道具]
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发表于 2014-6-20 16:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
那就跑12％的吧，
祝你好运！
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kuaizige[使用道具]
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发表于 2014-6-20 16:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
试一下在样本上样前12000转/min离心五分钟，再上样，这样也许对你有帮助，我试过的，挺好，还有胶要凝透了，跑出来的带直，胶的浓度可以多试几个，有时候丙稀酰氨的浓度不是30％而是40％（仔细看说明书），这样如果安分子克隆上的胶浓度配会配出来的大于书上的说，做western blot真是个大学问呢
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发表于 2014-6-20 16:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们用20mA的稳流跑，溴酚蓝就会横向扩散，改成100v稳压的就好了，你可以试试看。
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