【求助】想问问关于蛋白质的除盐浓缩

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标题:【求助】想问问关于蛋白质的除盐浓缩

caihong[使用道具]
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发表于 2014-6-20 17:14 资料个人空间短消息加为好友

小中大

看了大家关于蛋白质透析的讨论感觉受益匪浅，但是我还有点疑问。我做的是CsCl密度梯度超速离心纯化蛋白，现在需要做电镜负染就必须除去样品中的重金属盐离子，可是纯化后的蛋白浓度并不高，所以我想透析兼浓缩。不知道怎么设计比较好，我想用PBS作透析外液，4度透析过夜，然后用PEG包埋浓缩。我的透析袋截流分子量14000是不是就的选用PEG〉14000的才行需要多长时间呢？浓缩是还用原来的透析袋就行还是用玻璃纸？
没做过透析，而且样品得来不易，希望大家能多多帮助！

ququer787[使用道具]
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发表于 2014-6-20 17:15 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我觉得超滤的方法也不错，不知道在你这里适不适用，超滤即可以去除不需要的分子（只要选用了合适的截流分子量），又能起到浓缩的作用！

caihong[使用道具]
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发表于 2014-6-20 17:16 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我用过超滤,觉得损失太大,何况他的蛋白浓度本来就不高
要透析 ,我觉得可以先浓缩再透析,是不是除盐更彻底,PEG包埋很快就可以浓缩,你得观察到了你所需要的体积就停止,不然等水洗干了,你的蛋白也就不好洗下来了,用透析袋就可以做浓缩,PEG分子量稍大一些

utt0989[使用道具]
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发表于 2014-6-20 17:16 资料个人空间短消息加为好友

小中大

如果PEG的分子量小于透析袋的截流分子量的话，是有可能使PEG跑到透析袋里面去。可以选择截流量小的透析袋阿，有10000的，还有7000的。透析和浓缩可以交替进行，因为盐浓度高的话会影响蛋白活性。
我采取的方案是先放PBS中透析3~5h,然后将其投入到50%的PEG溶液中进行浓缩，约1~2h,再透析2h,浓缩1h就差不多了，也可以多重复几次。
注意浓缩和透析时最好放入冰箱中。

utt0989[使用道具]
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发表于 2014-6-20 17:17 资料个人空间短消息加为好友

小中大

浓缩后再透析时最好换新的PBS溶液。因为之前的PBS溶液离子浓度比较高了，已达到透析平衡。PEG溶液用完后可以烘干一部分水，下次可以再利用。

gogo[使用道具]
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发表于 2014-6-20 17:17 资料个人空间短消息加为好友

小中大

超滤和透析我们都使用过。
我们蛋白质的除盐用的是透析,在4度的温度下，加入了大量的缓冲液透析过夜，必须在搅拌的状态下，这样除盐效果较好，再采用PEG包埋。
我觉得超滤的方法挺好的。但是使用超滤的方法除盐比较彻底，而且较方便。但是成本较高。