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标题:【求助】二维电泳中SDS－PAGE胶面不平

luoliqiong[使用道具]
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发表于 2014-6-21 09:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】二维电泳中SDS－PAGE胶面不平


我每次灌胶后立即用去离子水封，但胶凝后SDS-PAGE胶面总是形成规则波浪状，请问高手是什么原因，谢谢
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fei1226com[使用道具]
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发表于 2014-6-21 09:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

建议:
1) 贴壁缓慢加封胶液,同时,可适量减少AP浓度,减慢凝胶的聚合.
2) 用水饱和的正丁醇封胶(或0.1%SDS 溶液封胶)
试试看!应该管用!
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luoliqiong[使用道具]
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发表于 2014-6-21 09:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我按照楼上的意见又做了一次，改善了一些，但还是有点小波浪，是不是我板子有漏的缘故呀，望指教，谢谢！
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xyw5[使用道具]
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发表于 2014-6-21 09:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

现在一般用乙醇封胶。胶面不平可能是你灌胶时液面太高的原因，距离玻璃板上沿1~2mm试一下，压完乙醇不要动，静置。
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zhenxin[使用道具]
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发表于 2014-6-21 09:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
最后灌胶时倾斜一些，放平后去离子水封。
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fei1226com[使用道具]
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发表于 2014-6-21 09:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

一定要避免灌胶器漏胶,要不然,不仅胶面会不整齐,局部还会发生聚合不均匀的现象,跑出的胶好看不到哪里去.(特别在大通量灌胶时会显得更严重)
另建议封胶液多加一些, 试过17cm 的胶,用1.5ml的封胶液比用1ml的效果好.
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发表于 2014-6-21 09:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

缓慢
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uaubc[使用道具]
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发表于 2014-6-21 09:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我一般用乙醇封，估计可能是模具的问题！
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abc816[使用道具]
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发表于 2014-6-21 09:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也用去离子水封的。感觉还好。你用的板子有问题吗？？
做了几次都这样，应该是仪器的问题吧
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wmp1234[使用道具]
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发表于 2014-6-21 09:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

用水封肯定没问题
如果你板子刷的干净的话
慢慢封是不会不平的
建议多加点TEMED加快凝胶速度
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