【求助】】SDS-PAGE蛋白样品积压在上层胶和下层胶分界...

蛋白质与蛋白组学 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】】SDS-PAGE蛋白样品积压在上层胶和下层胶分界...

13 1/2 1 2 ››

需要登录并加入本群才可以回复和发新贴

打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】】SDS-PAGE蛋白样品积压在上层胶和下层胶分界...

KGZ564[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 74472
精华 0
积分 452
帖子 583
信誉分 100
可用分 3756
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-11
状态离线

发表于 2014-6-21 09:38 资料个人空间短消息加为好友

小中大

昨天跑蛋白电泳，上层胶4%，PH6.8，下层胶15%，PH8.8，电泳结束后发现目的蛋白条带非常细，大部分都积压在上层胶和下层胶的中间，考染颜色很深，不知道是什么原因，今天又跑了一次，就比较正常了。
问了很多人，大部分也都经历过这种情况，都说再跑一遍就好了，但是由于不知道原因心里一直没底，希望各位大侠不吝赐教，小弟多谢了

wmp1234[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 79925
精华 0
积分 588
帖子 855
信誉分 100
可用分 5078
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-17
状态离线

发表于 2014-6-21 09:38 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我觉得像是目的蛋白样品的问题，有可能是样品太粘稠了或是有不溶性的东西，不易跑进分离胶。

bs4665[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 75127
精华 0
积分 505
帖子 650
信誉分 100
可用分 4136
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-19
状态离线

发表于 2014-6-21 09:38 资料个人空间短消息加为好友

小中大

可能是你加上层胶的时候之前没把压下层胶的水或酒精吸干净,导致上下两层胶之间形成比较厚的水带

dog002[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 76386
精华 0
积分 916
帖子 1452
信誉分 100
可用分 8133
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-4
状态离线

发表于 2014-6-21 09:38 资料个人空间短消息加为好友

小中大

单看现象应该考虑有多聚体产生或者有其他不溶的大分子。既然后来跑正常了，应该是制胶的问题。

fsdd817[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 78590
精华 1
积分 590
帖子 795
信誉分 102
可用分 4841
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-30
状态离线

发表于 2014-6-21 09:39 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 KGZ564 于 2014-6-21 09:38 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

昨天跑蛋白电泳，上层胶4%，PH6.8，下层胶15%，PH8.8，电泳结束后发现目的蛋白条带非常细，大部分都积压在上层胶和下层胶的中间，考染颜色很深，不知道是什么原因，今天又跑了一次，就比较正常了。
问了很多人，大部分也都经历过这种情况， ...

没有将分离胶的水封吸干净，就配了压缩，胶可能没有凝好的时候，就拔梳子不小心，将两层胶断开，结果样就跑不下去了。

daod[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 76758
精华 0
积分 585
帖子 790
信誉分 100
可用分 4891
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-9
状态离线

发表于 2014-6-21 09:39 资料个人空间短消息加为好友

小中大

对两层胶中间有间隙,所以样品都积在中间了.以后操作的时候不要心急哦,祝你试验顺利!

KGZ564[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 74472
精华 0
积分 452
帖子 583
信誉分 100
可用分 3756
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-11
状态离线

发表于 2014-6-21 09:39 资料个人空间短消息加为好友

小中大

谢谢各位了
但我可以肯定不是因为中间有间隙
今天又跑了一次
特别注意电泳的小心操作
可是又发生了那种情况
哎真是郁闷
我觉得可能是样品的问题
因为我跑的marker就没有滞留的问题
但是样品是我从亲和层析下来的呀
而且上样前也离心了的
真不知道是怎么回事

KGZ564[使用道具]
三级
Rank: 3