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» 【求助】过Glutation Sepharose 4B亲和层析住后怎么有这么多..
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标题:【求助】过Glutation Sepharose 4B亲和层析住后怎么有这么多..
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发表于 2014-6-21 10:05
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加入triton x-100的量大概是0.1%,或者tween 0.5%左右
可在bingding buffer和样品中加入,甚至在裂解细菌的时候就可以加入。去垢剂有降低杂蛋白吸附的作用,但一般也会减少目标蛋白的结合。不过你的杂蛋白是gst的片断,是否有效果只有做了才知道。
直接切胶回收是可以的,但要求你的胶孔足够大,才能保证含量,所以需要用大板胶来跑。
总之,我觉得GST亲和并不是那么简单,要看运气了,最麻烦的就是表达终止。
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