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标题:【求助】]今天刚做的二维结果，问题出在哪里？

chengjie79[使用道具]
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发表于 2014-6-21 10:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】]今天刚做的二维结果，问题出在哪里？


我的大致过程是：30v，12h；500,1h；1000,1h；8000v，7h。我跑的时候怎么也达不到8000v，只能达到3000多一点所以总共才20000vhs电压上不去是什么原因呢？要是我加长时间使得达到40000vhs这样对胶条有什么影响吗？我觉得点太少了，上样量都到0.8mg了！盼望大家给我指点一下，衷心感谢！另外胶面上很多脏东西不知道是怎么弄上去的？


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2014-6-21 10:33
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chengjie79[使用道具]
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发表于 2014-6-21 10:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我自己觉得可能的原因，一个是一维的总的聚焦没用达到40000vhs但是要达到这个数一维就需要跑25h这样对胶是不是有影响？还有上样量太大了吗对于银染来说？
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chengjie79[使用道具]
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发表于 2014-6-21 10:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我的银染背景很深，看到别人的结果几乎没什么背景这是为什么呢？哪些因素影响背景？
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nvdabing[使用道具]
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发表于 2014-6-21 10:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

那是背景的问题，应该是在银染的时候使用的药剂特别是水的问题。试试用去离子水吧！不过我没有从图上看出聚焦不彻底的反应。蛋白电少应该是其他的原因造成的！不如蛋白提取方法的原因或者是材料本身的原因.有些材料的蛋白种类本来就不多！
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chengjie79[使用道具]
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发表于 2014-6-21 10:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我做银染时用的就是去离子水而且做的是全细胞裂解的样品所以点肯定不能这么少的！我看这个胶左边的点还行但是右边的点就是特别少，这是为什么？
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chengjie79[使用道具]
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发表于 2014-6-21 10:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
还有我每次在这个版发文都要我修改标题上次是说没有表明类型是求助这次我特意表明了是求助还是要我修改标题，版主能给我解释一下吗？谢谢
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bamboo16[使用道具]
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发表于 2014-6-21 10:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

背景深的原因可能有：1。水，必须用去离子水；
2。各种溶液尽量新鲜配制；
3。操作时尽量不要用手或其他工具接触凝胶；
我建议的一向聚焦的参数是：
30v ，10小时； 500v ，0.5小时； 1000v ， 0.5小时；3000v，1小时；
5000v，1小时；8000v，至结束（大概80000vhs）。
另外电压上不去，可能和样品制备有关，盐离子浓度也有影响，建议查一些文献，改进制备方法。
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发表于 2014-6-21 10:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你的marker很好啊
是怎么加的？用梳子吗？我的梳子太大装不下啊
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chengjie79[使用道具]
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发表于 2014-6-21 10:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 bamboo16 于 2014-6-21 10:35 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

背景深的原因可能有：1。水，必须用去离子水；
2。各种溶液尽量新鲜配制；
3。操作时尽量不要用手或其他工具接触凝胶；
我建议的一向聚焦的参数是：
30v ，10小时； 500v ，0.5小时； 1000v ， 0.5小时；3000v，1小时；
5000v，1小时；8000v，至结束（大 ...

谢谢你的解答，你的聚焦参数80000是指多大的胶？我的是13cm的要不了这么多吧！还有一个问题聚焦这么长时间，对胶本身没有影响吗比如胶因为太久了破了或缺损了什么的？
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chengjie79[使用道具]
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发表于 2014-6-21 10:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
marker挺好用的，是直接用滤纸点上marker加的不过我的滤纸是随机器带过来的！
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