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标题:【求助】蛋白脱盐浓缩的好办法

天蝎座[使用道具]
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发表于 2014-6-21 17:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
PEG有很多种啊,因为它是一种聚合体,所以分子量有高的如PEG20000也有底的PEG2000不等啊,如果你的透析袋孔径太大,不就漏进去了吗
page跑不动很可能就是盐的问题,盐会中和SDS的负电荷,自然就跑不动了,也有可能是胶和buffer 的问题
对了,你的蛋白冷冻干燥后溶解了,怎么保存的啊,你是分成一管管的小份,分别溶解.不用的就直接保存了，还是加了保护剂如甘油什么的放-80度保存啊,怎么才能不损失活性呢,呵呵
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yychen[使用道具]
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发表于 2014-6-21 17:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我是直接用buffer溶解后不用的冷冻，没有用什么保护剂。我认为应该看你的蛋白分子量大小了，是否怕冻！
那是不是选择peg的时候分子量大点应该好些吧！呵呵，谢谢！
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33号[使用道具]
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发表于 2014-6-21 17:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我认为低温超滤可行，正如前面几位所述，选择好膜很关键。其次避免损失，可以先浓缩大一些，后用适宜的缓冲液洗膜，并入浓缩液中。
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leifengta[使用道具]
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发表于 2014-6-21 17:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

冷冻干燥最好。
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天蝎座[使用道具]
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发表于 2014-6-21 17:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

是啊,我认为是这样的
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is2011[使用道具]
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发表于 2014-6-21 17:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

相关疾病：
脱水
超滤膜号称回收效率95％，是分蛋白性质的。我刚用的结果蛋白损失接近一半，效果比较差，个人认为单纯浓缩的话，冷冻干燥是最佳选择。分成小管，不加保护剂，保存于－20，用的时候合适体积缓冲液溶解即可。脱盐的话我都是用合适的透析膜低温透析，一般换液4－5次就可达到试验的要求。如果快速的透析膜浓缩的话，可以用合适的peg包埋脱水的，不过我自己没用过。我想如果既要脱盐又要浓缩，先透析，后冻干我个人还是很偏好的。不是很赞成超滤膜，因为造价高，效果也不好
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birdfish[使用道具]
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发表于 2014-6-21 17:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

也不能叫号称了
过程的设计和优化是门大学问。
主要看用途和规模，如果是实验室小量制备，透析就可以满足要求；如果是规模化生产，超滤是免不了的。
超滤可以buffer exchange，冻干除不掉盐的。
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