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标题:【求助】BSA标准曲线的制定

xevin[使用道具]
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【求助】BSA标准曲线的制定

用考马斯亮蓝染色的方法作BSA标准曲线,怎么也做不出来!4mg/ml,5mg/ml,6mg/ml,7mg/ml,8mg/ml,10mg/ml的bsa在595nm下的吸光值没有明显的区别,还出现浓度越大,吸光值越小的现象,真是令我哭笑不得,请高手指点,谢谢!
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milkdog[使用道具]
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为什么不用个盒子呢?我感觉pierce本身提供的曲线蛮好的,我做的和他差不多
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baidukk[使用道具]
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我用考马斯亮蓝染色的方法作BSA标准曲线,怎么也做不出来!4mg/ml,5mg/ml,6mg/ml,7mg/ml,8mg/ml,10mg/ml的bsa在595nm下的吸光值没有明显的区别,还出现浓度越大,吸光值越小的现象,真是令我哭笑不得,请高手指点,谢谢!

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你设定的不同BSA浓度差别不大,所以吸光度也不会相差很多;
你测得浓度越大,吸光值越小,可能是由于放置时间久了,因为放置较久的试剂产生的光吸收值较低。
用考染法测蛋白浓度作BSA标准曲线时,最好是每个浓度作2~3次重复,相同浓度的BSA测完OD值后取平均值作曲线。如果用同一个比色杯来测定蛋白质浓度,则应当先测量低蛋白浓度的样品,避免因Bradford染料吸附而带来误差。
测量时间最好不要过长,加完Bradford染液后应在30min内测完所有BSA及待测样品的OD值。
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bangqi_k[使用道具]
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你的BSA浓度太高了!
G250的线性范围应该在0.01mg/ml到1mg/ml,
做的时候稀释过了么?
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hold住[使用道具]
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同意楼上的看法,我也要做,但资料中BSA的浓度最大是40ug/ml,明天做了告诉你!
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dreaming[使用道具]
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就是浓度太大了
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dragonkilly[使用道具]
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我觉得还是Bradford法好一些
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cbou876[使用道具]
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是浓度太大了。你也可能用酶联仪测定。
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qqshepherd[使用道具]
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G-250的测定蛋白的浓度大到一定程度时候,不成线性关系。浓度一定要适中
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