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标题:【求助】我的western结果为什么总是出现哑铃状条带？

chenshuanhe[使用道具]
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发表于 2014-6-21 21:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】我的western结果为什么总是出现哑铃状条带？


我作的蛋白比较大，220kd，100v，我跑胶3－4小时，切胶，200ma湿转3.5小时，脱脂奶封闭1.5小时，二抗3小时，结果条带的两头总是有两个比较重的黑色，而中间确不是很清楚，不知道为什么？哪位作western的高手给点指点吧。谢谢了！
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mamamiya[使用道具]
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发表于 2014-6-21 21:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你是在杂交盒里做的吗？
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mamamiya[使用道具]
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发表于 2014-6-21 22:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你是在miniblotter里做的吗?
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mamamiya[使用道具]
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发表于 2014-6-21 22:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你每个泳道的蛋白上样量是多少？
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eve_49[使用道具]
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发表于 2014-6-21 22:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
上样量100ug蛋白，是在小平皿里面摇一抗4度过夜的，在给点指点吧，谢谢各位了！
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leifengta[使用道具]
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发表于 2014-6-21 22:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

您的一抗稀释比和二抗稀释比是多少？重新调整一下稀释比例
转膜时，你的膜最后一定很热吧，若由此情况，一定要考虑降温的，建议您用4度转过夜，先28V转1小时，然后再84V转印14－－－16小时。（主要是这点）有问题可以打我电话，021---64368276（晚上打给我8点后）
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leifengta[使用道具]
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发表于 2014-6-21 22:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

很大程度是转膜不均允造成的，需要转时间长一些
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chenshuanhe[使用道具]
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发表于 2014-6-21 22:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我试试看，如果有改善就不打你电话了，如果不行，可免不了麻烦你呢！再次感谢！我一抗稀释浓度为1：2500，二抗也是1：2500，我转膜的时候，时在4度转的，膜转完之后的温度我倒是没有注意，应该也不是很高，我前面几次作都没有出现这样的问题呀，不知道是为什么，是不是上样量太高了呢？百思不得其解呀
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chenshuanhe[使用道具]
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发表于 2014-6-21 22:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

跑胶电压，我原来用150v都没有问题呀，现在用100v慢慢来反而不行了，真是郁闷
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hold住[使用道具]
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发表于 2014-6-21 22:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

是否膜切成条了？
是否切的太细？
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