【求助】我的western结果为什么总是出现哑铃状条带？ - 经验共享

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标题:【求助】我的western结果为什么总是出现哑铃状条带？

milkdog[使用道具]
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发表于 2014-6-21 22:34 资料个人空间短消息加为好友

小中大

是不是上样量较大的原因呢，我们做western的时候上样通常控制在总蛋白
50ug,这样跑出的条带比较漂亮，现在你的上样量为100ug,个人认为上样量较大。
转膜如果用100v湿转的话，2h应该可以了。
还有跑胶电压是否可以调的大一些？我们跑分离胶时，通常用到140、160v。
建议从以上几个条件试试，祝好运.

jiushikeshui371[使用道具]
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发表于 2014-6-21 22:35 资料个人空间短消息加为好友

小中大

是不是上样量较大的原因呢，我们做western的时候上样通常控制在总蛋白
50ug,这样跑出的条带比较漂亮，现在你的上样量为100ug,个人认为上样量较大。

如你所言,mini胶100ug对于中低分子量蛋白来说是到极限了,50ug正好,但要考虑到目的蛋白220kd,是个很大的数字,很难转膜完全,有时为了提高检测的阳性率尚需特意提高上样量至极限,而且要加大转膜的力度.实际上分子量大了以后很容易出现哑铃状,主要原因是转膜不充分造成的,因为考染时可明确显示条带的分布多数是正常的.这么大的分子量,转膜力度大了也不会穿膜,倒是要提防不充分这个常见原因,考染转膜后的胶可确认.

chenshuanhe[使用道具]
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发表于 2014-6-21 22:36 资料个人空间短消息加为好友

小中大

谢谢诸位，我也会比较偏向转膜力度不够这个原因，200ma转3.5都不够，我想要不我还是转过夜算了，第二天在加大电压，200ma再转2小时，我觉得这样应该差不多了吧，各位还有什么高见么？多提点意见喔！

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