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标题:【求助】SDS电泳时的条件

standbyme[使用道具]
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【求助】SDS电泳时的条件


是不是跑电泳时把槽子放在4度冰箱里跑的啊?
我的跑出来蛋白条带老是糊掉,听他们说要放在冰上或者冰箱里跑,是不是啊?
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duoduo[使用道具]
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没有啊
我就是正常跑的啊
你用的是什么牌子的电泳仪啊?
我用的是六一厂的
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bamboo16[使用道具]
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没有啊
我就是正常跑的啊
你用的是什么牌子的电泳仪啊?
我用的是六一厂的
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tuuu2[使用道具]
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应该是胶的问题,我们实验室都是在室温电泳的,条带挺清楚的
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leifengta[使用道具]
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是不是忘记加SDS了?
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u234[使用道具]
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请讲一下你的电泳条件,大家分析一下
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standbyme[使用道具]
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我的电泳仪型号是上海博通BDY-2型,电泳槽是AUTTO公司的,按照版子里战友的方子配的胶和电泳缓冲液,但是跑的时间就是要长很多!前一次把槽子放在4度冰箱里跑,结果同样的蛋白量跑出来的条带颜色明显浅很多。
我怀疑是电泳仪的问题,因为我把它设成是恒压的结果倒是恒流的,设成恒流的结果电压电流一直都在变。我要用恒流的,所以就调成恒压的跑……晕啊!
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u234[使用道具]
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因为我把它设成是恒压的结果倒是恒流的,设成恒流的结果电压电流一直都在变。我要用恒流的,所以就调成恒压的跑……晕啊!
根据你以上的叙述,估计是电泳仪功率与电泳槽不配套。不知道你在哪里,如果在北京,可以PM我,帮你看看。
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glass[使用道具]
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除非跑Tricine胶这种大功率的电泳(电压×电流)可以在4度电泳,
低温时SDS容易析出。还是电泳条件和胶的问题。
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standbyme[使用道具]
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我在南京啊,不在北京。
电泳的条件如下:
5*电泳缓冲液300ml:tris 4.53g,甘氨酸 28.3g,10%SDS 15ml,配置成300ml,并调ph为8.3.
12% 分离胶15ml:水 4.9ml,30%acr-bis 6.0ml,1.5Mtris-cl(ph8.8) 3.8ml,10%SDS 0.15ml,10%ap 0.15ml,TEMED 0.006ML.
5%浓缩胶5ml:水 3.4ml,30%acr-bis 0.83ml,1.0MTris-cl(ph6.8) 0.63ml,10%SDS 0.05ML,10%AP 0.05ml,TEMED 0.005ml.
用的恒流20mA,要跑四个小时左右,放在4度冰箱里结果跑了四个半小时,与放在室温条件相比,同样的蛋白量跑出来的条带颜色明显浅很多。
请各位高手帮忙啊!
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