蛋白质与蛋白组学 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】分子筛如果提高分离效率

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】分子筛如果提高分离效率

vvmmoy[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79224
精华 0
积分 825
帖子 1270
信誉分 100
可用分 7255
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-8
状态 离线
1

发表于 2014-6-25 18:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】分子筛如果提高分离效率


我们实验室用的是pharmacia 的 sephadex G50 medium自己装的50cm长的柱子，我现在用它来分GST（26KD）与切下来的目的蛋白（12KD），发现分离的效果很差。实验室其他人分GST（26KD）和5KD的蛋白虽然能获得较纯的目的蛋白，但是会有较多的损失（目的蛋白有GST污染）。流动相我们用过水，PBS，Tris，感觉没什么大的差别。流速从1ml/min 到0.25ml/min都试过，也没有明显改善。没有经验，真是不知道该怎么优化分离条件，还是这个填料就是很难把26KD和12KD的分开？请教高手指点一二！急呀！
顶部
PINK[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 73133
精华 0
积分 418
帖子 536
信誉分 100
可用分 3488
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-19
状态 离线
2

发表于 2014-6-25 18:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

柱效有多少？上样体积多少？流速对分子筛的影响比上样体积要小得多。
顶部
remenb[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75236
精华 0
积分 631
帖子 941
信誉分 100
可用分 5531
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-20
状态 离线
3

发表于 2014-6-25 18:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
加长柱子到80或100cm,还超细填料,或者换刚性好颗粒细的34um的填料.
顶部
33号[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 74277
精华 0
积分 549
帖子 757
信誉分 100
可用分 4611
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-9
状态 离线
4

发表于 2014-6-25 18:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

分子量差别不大，还是试一下离子柱，我以前做过用SuperdexG-75分34kDa和15KDa的蛋白也没有获得成功。如果杂蛋白不多的话，我建议您考虑使用Sepharose HP或 Source Q 30.，估计问题不大。
顶部
JK.jon[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75188
精华 1
积分 528
帖子 652
信誉分 102
可用分 4146
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-10-20
状态 离线
5

发表于 2014-6-25 18:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

现在的问题就是不能换柱子。我们老板过日子很仔细滴。愁啊
顶部
fei1226com[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79957
精华 0
积分 599
帖子 898
信誉分 100
可用分 5286
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-18
状态 离线
6

发表于 2014-6-25 18:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

降低流速
增加床高
选用高效填料
减少样品体积
顶部
mamamiya[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 72974
精华 0
积分 653
帖子 986
信誉分 100
可用分 5763
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-16
状态 离线
7

发表于 2014-6-25 18:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

建议将FPLC,该为用HPLC.
顶部
xyw5[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75137
精华 1
积分 620
帖子 815
信誉分 102
可用分 4991
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-10-19
状态 离线
8

发表于 2014-6-25 18:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
可是你们老板太抠不能换柱那就没什么办法了. 本来G50分这两个蛋白也就不是容易的事
顶部
bling[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 77268
精华 0
积分 383
帖子 486
信誉分 100
可用分 3216
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-15
状态 离线
9

发表于 2014-6-25 18:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

换好的填料，我用过SuperdexG-75（超细的），装柱子的时候要控制流速，我的柱子柱效是9000多，不过不知道准不准，分离效果还可以，但不知道可不可以分得开，还有上样量不能太大，1.6*50cm的柱子我一般只上1ml，2.6*70的我一般上5ml.
顶部