【求助】双向电泳中如何增加碱性区的蛋白质点

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标题:【求助】双向电泳中如何增加碱性区的蛋白质点

skytree[使用道具]
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发表于 2014-6-26 17:21 资料个人空间短消息加为好友

小中大

是血浆的电泳银染结果，麻烦大家看看问题出在哪里？急盼

附件

2014-6-26 17:21

85635446.snap.jpg (26.99 KB)

qqq111[使用道具]
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发表于 2014-6-26 17:22 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我觉得你的图最大的问题可能就是图的横条纹很多，点也不是太齐整。重要的原因就是你的第二向的操作有问题：凝胶的时候上胶面不平或者是胶条与PAGE胶的胶面接触有问题！

wawa[使用道具]
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发表于 2014-6-26 17:22 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我觉得问题应该是第一向等电聚焦没有聚好，所以才造成横条纹很多．而且图的上半部分背景深，而下半部分的背景浅，很可能与你第二向所用的琼脂糖有关．琼脂糖应每次新鲜配制，且浓度严格控制，浓度过高容易造成银染背景深

zhezhe[使用道具]
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发表于 2014-6-26 17:22 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我觉得这次电泳一向二向都存在问题，一向蛋白没有聚集好，点不能很好的分开，血浆中高丰度的蛋白需要事先除去的。如果你已经除去了那蛋白上样量可以减少些。
二向蛋白点也没有拉开，建议试剂等重新配过，你的胶质量不是很好，是不是配胶试剂不好啊，PH值对吗，我们双向一般都用进口试剂胶的质量还是很好的。

skytree[使用道具]
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发表于 2014-6-26 17:22 资料个人空间短消息加为好友

小中大

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头痛
谢谢各位！
胶条转移一直是个头疼得问题，总是难以完全放好。可以提供具体的方法吗？
琼脂糖的问题以前没有考虑到，可以改善一下看看。
试剂是进口的，上次配TRIS时对酸度计的结果有点疑虑明天再测测PH值看看。
另外，胶凝好后当日用好吗还是4度过夜的好？是不是看到折光界面就可以用了，大概距灌胶2小时。

niangao1980[使用道具]
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发表于 2014-6-26 17:23 资料个人空间短消息加为好友

小中大

胶凝好后最好当日用!
对于18或24CM的干胶条的PAGE胶，最好多凝一会！

cwcwcww[使用道具]
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发表于 2014-6-26 17:23 资料个人空间短消息加为好友

小中大

错，二向凝胶最好4℃过夜。SDS-PAGE倒没有严格要求

orangecake[使用道具]
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