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标题:【求助】双向电泳中如何增加碱性区的蛋白质点

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由于楼主的图谱上有很多横条纹,这是第一向聚焦没聚好的主要表现.导致第一向聚焦没聚好的原因(我所知道的)有:1.温度,如果室温底于胶槽内的温度,在第一向时候会产生水汽,水汽凝结多了,影响胶槽电极的导电;2.如样品中含的核酸等杂志过多,核酸与蛋白质相互作用,造成蛋白质聚合,也会影响正常聚焦;3.盐浓度过高;4.胶槽内的DTT终浓度偏高,由于它带电,也会造成影响;5.上样体积没有严格控制好,(加多了)在盖胶槽盒时造成胶槽内的液体外溢,影响胶槽盒电极与金属板之间的导电,最终影响聚焦. 
至于解决的办法就是尽量避免上述情况的出现,比方说:控制好温度,开空调调节好室温;严格控制上样的总体积等等.   
本人所知有限,请各位指教!
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小游abc[使用道具]
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补充一下:上样时蛋白质样品中盐离子浓度不应该超过10mmol/L,可以使用层析,透析或TCA/丙酮沉淀法脱区离子,或非离子型去垢剂浓度至少8倍于SDS的浓度;有时候,聚焦时间不够也导致蛋白质点没有完全到达等电点位置
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