小中大我用PET-30a载体中表达蛋白基本上都在超声沉淀中,8M尿素不能溶,还怎样处理呢?
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如果8M的尿素不能溶解的话，那么盐酸胍也不一定能溶。
我觉得不是8M的尿素不能溶解你的包含体，而是你包含体的处理过程可能出现问题了，下面是包含体处理的流程，你有时间试试吧。
1、首先是诱导表达后收集湿菌体重悬于PBS中。
2、然后是反复冻融3、4次（－80/40min、37/10min)
3、之后是超声，超声强度需要根据表达菌自己掌握。我的表达菌是BL21，超声强度是300W（10s/10s)
4、之后就是离心收集包含体，然后用洗涤液1，也就是含有曲拉通的那种洗涤一次，冰上30min。
5、之后离心然后用洗涤液2，也就是低浓度尿素（2M）洗涤一次，之后冰上30min。
6、之后离心收集沉淀，加入8M的尿素，然后每个EP管加入15－20ul的DTT，4度过夜。
7、然后离心去掉沉淀即可。
注意各段的样品都要留出少量跑page确定蛋白的存在状况以确定下一步方案。
以上仅供参考。
