小中大【求助】请教SDS-PAGE和WESTERN BLOT
各位,我做了几次SDS-PAGE和WESTERN BLOT,有几个问题总是出现,帮我看看是怎么回事吧!谢谢各位了!
1.用的是5%浓缩胶,12%分离胶,浓缩胶高度约齿下0.5厘米,分离胶高度约6.5厘米。浓缩胶电压40V,分离胶电压80V,浓缩胶30分钟就跑完了,分离胶2小时就跑完了。这个速度是不是太快了?
2.我用的是北京六一厂生产的电泳槽,不需要用琼脂糖封胶,但每次取下封边条后凝胶底部两玻板之间总有气泡,很难排干净。怎么办呢?
3.每次考染后都发现样品跑歪了,尤其是MARKER,歪到别的泳道上去了。怎么回事呀?
4.今天我封闭时不小心将膜的蛋白面朝下振荡了1小时,后来想起来了才将面翻过来。这对实验有没有影响啊?为什么一定要膜的蛋白面朝上呢?