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标题:【求助】请教各位专家评价我的2D-gel图

寻梅[使用道具]
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发表于 2014-6-27 11:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】请教各位专家评价我的2D-gel图


请教!
各位专家看一下我的这两张电泳图,有什么问题?如何解决?一张图纵条纹太多,还有蛋白斑点好像拉不到前沿,是什么问题?如何解决?
谢谢!


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2014-6-27 11:20
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发表于 2014-6-27 11:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我觉得你的一向应该没有问题，二向电泳时多跑一段时间蛋白就会拉开到前沿。不知你二向是什么条件，我的使用伯乐系统恒压进行的。
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发表于 2014-6-27 11:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我觉得你的图不错。作双向不要把图看得那么重要，能满足要求就好。关键得完成后续的分析检测等研究。
如果非要改进也就是有些点又拖痕（不是大面积的），如果不是关键点就不要计较了。
这些拖痕应该和点的蛋白量有关，也有可能与蛋白的稳定性有关，控制温度因该可以改善。
其实我看过的一些文献里的图可不如你的。：）
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发表于 2014-6-27 11:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

多谢!我也是使用伯乐系统恒压进行的.
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发表于 2014-6-27 11:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我想知道你的银染为什么是这种颜色？我的是微黄色，而且背景挺深的！
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发表于 2014-6-27 11:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

有个问题想问问版主，今晚刚上的时候还是3分怎么现在就变成2分了？我要是有什么问题至少也要给个理由吧！做人要厚道！
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发表于 2014-6-27 11:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请先学习置顶的版规和发帖规范再按照格式发帖。
你不学习版规，不按格式发帖，已经因此耗费了别人有限的精力和时间来提醒和纠正，也不便于其他战友的浏览。
遇到问题，请先从自己本身找原因。
丁香园那么多战友，每天蛋白版发贴200多，版主都有自己的工作，不可能个个提醒！
另外，学习版规前，请先到新手成长版好好学习论坛的使用，不要急于到专业版块找个答案了事，循序渐进，这样才能真正提高。
谢谢支持
以下为不规范帖链接：
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=6023904&sty=3')
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ladyhuahua[使用道具]
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发表于 2014-6-27 11:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

二向用恒流，20mA/胶 40分钟；30mA/胶 至结束。
你的上样量是多少？拖痕可能是上样过大或是蛋白降解的问题
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ladyhuahua[使用道具]
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发表于 2014-6-27 11:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

银染的颜色一般是棕色，但是根据蛋白量的不同会有一些不同，我自己试验中有时发现蛋白过多时甚至出现反显的表现，就是看上去似乎有点透明了，但你可以从边缘看出其实蛋白量蛮高的。
背景深我觉得主要的原因是增敏后水洗，以及银染后水洗的程度不够所致，Protocol里洗的时间和次数对具体的实验不一定是最优的，举个例来说，24 cm的胶和13 cm的胶洗的时间就不一样，我的经验是胶越大，洗得应该更充分结果才会理想，但是银染那一步的洗涤要注意，洗过了很可能导致染不出点，因为银染是染表面的。你在实验中应该注意观察一下，增敏洗涤后加入银染液是否溶液会变色，如果变了说明洗涤肯定是不充分的。这是我的经验，供你参考，希望你成功！
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xue258[使用道具]
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发表于 2014-6-27 11:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我觉得您的这张胶有一点聚焦过度了，蛋白点有明显的被挤压的感觉，聚焦过度也会有短的竖纹
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