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关于此酶的底物是已知的吗?
如果是已知的话那就好办些。你可以如我前面所说,去掉这100个aa,看还是否具有与底物结合的能力,或者单独拿出来100aa与GST偶联看是否能够pulldown下底物来?
如果此酶的底物也是未知的话,那首先就是要找到此酶的作用底物了。可以首先用酵母双杂交进行广泛筛选,对一些有意义克隆再单独进行验证,主要就是验证蛋白相互作用的一些方法,如IP,GST PULLDOWN等。然后就是对此酶进行区域分段利后酵母双杂交来寻找与底物的结合区域,然后其他方法进行验证,等等。
总之就是蛋白相互作用的验证。