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标题:【求助】干扰素的纯化

gemei0115[使用道具]
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【求助】干扰素的纯化


小弟最近在学习人重组干扰素的纯化,有些问题想请教各位前辈
以下是一个初纯干扰素的方法:细胞破碎:将重组大肠杆菌溶于缓冲液,进行细胞破碎后,离心,取上清——〉酸化:调pH至2.0,离心,取上清——〉中和:调pH至7.0,取上清——〉盐析
我想问一下,上面这套纯化工艺中,酸化的目的是什么?利用的是什么原理?
个人认为应该是除去一部分杂质蛋白,不过不知道是除去哪些蛋白呢?
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nut6694[使用道具]
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这种纯化工艺实在没见过,百思不得其解,请问你从哪里参考来得。这个工艺不像纯化蛋白的,倒像是提取有机物的
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gemei0115[使用道具]
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这是一家生物公司的生产工艺,是一套比较老的生产工艺了
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gemei0115[使用道具]
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酸化这一步应该是根据干扰素蛋白耐酸性较强,从而使一些耐酸性较差的杂蛋白,变形沉淀。各位觉得这么解释对吗?
还有就是这步具体能除掉什么蛋白呢?这是我比较不了解的。
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xyw5[使用道具]
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呵呵 是够另类的纯化 请问楼主做的是哪种干扰素 a族还是?
我做过a族的 酸性条件下 干扰素容易聚集 形成多聚体 相反 碱性条件下更稳定一些。小于9的ph 对活性影响不大 酸性条件下不宜长久保存。
你按照这样的工艺做酸化前后纯度如何?
建议你作个对比 看看不经酸化的和酸化的干扰素纯化结果活性和蛋白纯度关系。
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gemei0115[使用道具]
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我做的是a1b,你做的是什么啊?
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shenkunjie[使用道具]
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酸化这一步应该是根据干扰素蛋白耐酸性较强,从而使一些耐酸性较差的杂蛋白,变形沉淀。各位觉得这么解释对吗?
还有就是这步具体能除掉什么蛋白呢?这是我比较不了解的。

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但是用这么低的pH,耐酸再强,也容易变性啊,当然没有做过,不敢乱说
一般干扰素a1b的纯化工艺是比较成熟的,也没有什么特殊的地方,文献可以查到很多,主要是包含体复性、透析、离交、疏水等等,酸化确实没见过。
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jujuba[使用道具]
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楼主的这个工艺是从提取白细胞干扰素的工艺中移植过来的。白细胞干扰素的含量非常低,利用I型干扰素抗酸的特点,在上游工艺中设计了酸化这个步骤,可以去除很多不耐酸的杂蛋白;后续的离子交换等纯化步骤还是需要的。阿尔法干扰素在pH2酸性环境下可以稳定十数小时,形成的聚合体不至于沉淀而且可以在中和后部分还原。
在重组干扰素产业化进程当中,早期工程菌的表达量很低,90年代的前半段,国内外很多厂家在纯化工艺中不得不采用单克隆亲和层析技术,亲和层析的洗脱液多采用的也就是1%冰醋酸。
酸化能够出去哪些杂蛋白,如楼上所言,电泳比较一下酸化前后样品,即可知道。至于去除的蛋白究竟是什么蛋白,这个问题毫无意义,评价一个纯化步骤的效果主要是看目标蛋白的纯度提高和回收率。
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PINK[使用道具]
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有一些多肽的提取用有机溶剂萃取,更变态,我搞生化的看着都觉得好奇怪的,根本想都不会想到的.不知道那帮人是怎么想出来的.
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xyw5[使用道具]
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QUOTE:
原帖由 gemei0115 于 2014-6-27 15:26 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
我做的是a1b,你做的是什么啊?


a2a
a2b
呵呵 a1还真没有做过相关纯化工作。。
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