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标题:【求助】请指点SDS-PAGE电泳照片中的一个问

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发表于 2014-6-27 17:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】请指点SDS-PAGE电泳照片中的一个问


下面是我做WESTERN时电泳后直接考染的照片,不知道什么原因,在靠下的部分有很浓的一条连续的线,并且以线为分界,线下面的泳道明显与上面偏离,我的同时做的另一块胶进行了后续步骤,发现在一抗洗膜的时候也可以在PVDF膜上看到类似的线,在ECL洗出来的片子中那条线是最显著的连续的带,请教那条线到底是电泳时什么样的原因造成的?谢谢
有师兄怀疑那条线是上面的分离胶和下面的封口用的琼脂糖的分界线,我已经仔细比较过了,排除了这种可能性.


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2014-6-27 17:08
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发表于 2014-6-27 17:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你这是缓冲液反复用久了,缓冲液里面有杂蛋白日积月累而成,我碰到过这种情况,换了新的缓冲液后问题就迎刃而解了
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发表于 2014-6-27 17:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢指点!但我电泳的时候,内槽用的缓冲液都是用新鲜的10*稀释10倍后来用的,应该不会影响电泳条带上的蛋白,外槽用的是回收的缓冲液,但也不会影响啊,请问这是怎么回事?
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发表于 2014-6-27 17:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你确定那不是分离胶和下面的封口用的琼脂糖的分界线？
我的电泳时常也会有出现的，没有你的这个明显就是了。或者你再试试调试一下pH值还有电泳的电压。
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发表于 2014-6-27 17:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我没有在你的胶上看到溴芬兰的位置，而你空白孔和marker都有，会不会是溴芬兰？在PVDF膜上看到类似的线，兰色的吗？不然如何看到了？溴芬兰据说相当于7kd的，不知位置对不对？如果不对，那可能也还是上样缓的问题吧
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发表于 2014-6-27 17:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

很可能是溴芬兰．
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发表于 2014-6-27 17:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

应该不是溴芬兰，因为左侧的点样孔我是空着的，什么也没有加，而下面依然出现了那条线，可能是缓冲液的问题吧，我再试一下
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发表于 2014-6-27 17:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我觉得是溴酚蓝前沿
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发表于 2014-6-27 17:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
很大可能是电泳缓冲液的问题,你可以试试全部重新配制;
另一个可能就是分离胶缓冲夜有问题,你可以试试,我们实验室也遇到过这种情况.
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发表于 2014-6-27 17:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我以前也遇到过这种情况，原先以为是溴芬兰前沿，于是在上样缓冲液中不加溴芬兰，但是仍然出现这种现象，后来是几乎更换了配胶的所有试剂，主要是buffer，sds，还有电泳buffer，就没有出现这种情况了，所以，我想，应该是配胶试剂的问题，应该换新的
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